重组人乳铁蛋白奶粉对仔猪免疫应答和骨形成的影响

发布时间：2021-04-02 10:54

　　乳铁蛋白（lactoferrin,LF）的分子量是80kDa,它是一种铁结合性的糖蛋白,是转铁家族成员之一,具有调节免疫、铁离子平衡、调节肠道菌群、骨形成以及抗菌、抗氧化、抗炎、抗病毒和抗肿瘤等多种生物学功能。LF作为功能性食品、保健品和药品具有广阔的应用和开发前景。LF主要由中性粒细胞和外分泌腺的上皮细胞分泌,其含量在人类母乳中为1-5mg/mL,而在婴儿奶粉中只有0.02-0.2mg/mL.本实验室利用含有人LF基因的BAC成功获得了能够生产重组人乳铁蛋白（rhLF）的转基因克隆奶牛,乳中rhLF的表达量高达3.4g/L。而该hLF对婴儿免疫和骨发育的影响尚不清楚。本研究以新生仔猪作为婴儿的体内实验模型,研究含有该rhLF的奶粉对新生儿免疫应答和骨形成的影响及作用机制。将18头出生7天的长白公猪分为3组进行rhLF转基因奶粉30天饲喂实验,OM组饲喂普通奶粉作为对照,MM组饲喂普通奶粉和rhLF奶粉1：1混合的奶粉,LFM组饲喂rhLF奶粉。饲喂过程中每天观察记录自然条件下仔猪发生腹泻的情况。饲喂实验结束后对仔猪进行宰杀,采集各种样品进行后续分析,包括仔猪是否出现过敏反应、免疫应答... 

【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：121 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
縮略词
第一章 引言
    1.1 乳铁蛋白的理化性质
        1.1.1 LF基因的表达调控
        1.1.2 LF的结构
        1.1.3 LF的肽段
        1.1.4 LF的稳定性
        1.1.5 LF分子结合性质
    1.2 乳铁蛋白的生物学功能
        1.2.1 抗菌活性
        1.2.2 抗病毒活性
        1.2.3 抗真菌活性
        1.2.4 抗寄生虫活性
        1.2.5 抗肿瘤活性
        1.2.6 促进铁吸收和转运
        1.2.7 调节肠道菌群
        1.2.8 抗过敏
        1.2.9 阻断自由基
    1.3 乳铁蛋白在胃肠道中的存在形式
    1.4 乳铁蛋白对免疫系统的影响
        1.4.1 免疫系统
        1.4.2 免疫调节活性
        1.4.3 LF对固有免疫的影响
        1.4.4 LF对细胞免疫的影响
        1.4.5 LF对体液免疫的影响
        1.4.6 LF影响免疫的可能机理
    1.5 乳铁蛋白对骨生长发育的影响
        1.5.1 骨生长的生理演化
        1.5.2 影响骨骼发育的因素
        1.5.3 骨代谢疾病
        1.5.4 LF对成骨细胞的作用
        1.5.5 LF对破骨细胞的作用
        1.5.6 LF促进骨生长
    1.6 乳铁蛋白发挥生物活性的机制
    1.7 乳铁蛋白作为疾病的生物标记
    1.8 乳铁蛋白的其他作用
    1.9 乳铁蛋白的应用情况
        1.9.1 LF在食品保健品中的应用
        1.9.2 LF在医药卫生中的应用
        1.9.3 LF在农业生产中的应用
    1.10 人乳铁蛋白转基因的研究进展
        1.10.1 LF基因在真菌中的表达
        1.10.2 LF基因在植物及动物细胞中的表达
        1.10.3 LF基因在动物乳腺中的表达
    1.11 本实验室关于乳铁蛋白的研究工作
    1.12 本研究的目的、意义及方案
        1.12.1 研究目的及意义
        1.12.2 研究方案
第二章 材料和方法
    2.1 主要仪器设备与试剂、溶液的配制
        2.1.1 主要仪器设备
        2.1.2 工具酶及主要试剂
        2.1.3 主要药品及试剂的配制
        2.1.4 分析工具软件
    2.2 实验动物
        2.2.1 实验动物和实验设计
        2.2.2 饲养管理
        2.2.3 体重测定
        2.2.4 腹泻监测
        2.2.5 样品采集和血常规测定
    2.3 实验方法
        2.3.1 匀浆液制备
        2.3.2 免疫球蛋白、组胺和细胞因子表达分析
        2.3.3 肠绒毛形态分析
        2.3.4 免疫和过敏相关基因mRNA表达分析
        2.3.5 成骨细胞培养
        2.3.6 血清钙测定
        2.3.7 骨密度分析
        2.3.8 骨生物力学分析
        2.3.9 成骨细胞增殖MTT分析
        2.3.10 成骨细胞分化碱性磷酸酶活性测定
        2.3.11 ERK1/2磷酸化分析
    2.4 统计分析
第三章 结果与分析
    3.1 重组人乳铁蛋白对仔猪日增重的影响
    3.2 重组人乳铁蛋白对仔猪腹泻的影响
    3.3 重组人乳铁蛋白对仔猪血常规的影响
    3.4 重组人乳铁蛋白对仔猪过敏反应的影响
    3.5 重组人乳铁蛋白对仔猪体液免疫应答的影响
    3.6 重组人乳铁蛋白对仔猪细胞免疫应答的影响
    3.7 重组人乳铁蛋白对仔猪肠道组织形态的影响
    3.8 重组人乳铁蛋白影响仔猪免疫力的机制探讨
    3.9 重组人乳铁蛋白对仔猪血清钙水平的影响
    3.10 重组人乳铁蛋白对仔猪骨密度和骨矿盐含量的影响
    3.11 重组人乳铁蛋白对仔猪骨强度的影响
    3.12 重组人乳铁蛋白对成骨细胞增殖的影响
    3.13 重组人乳铁蛋白对成骨细胞分化的影响
    3.14 重组人乳铁蛋白对成骨细胞ERK1/2磷酸化的影响
第四章 讨论与展望
第五章 结论
参考文献
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]Inhibition of tryptase release from human colon mast cells by protease inhibitors[J]. Shao-Heng He Hua Xie,Allergy and Inflammation Research Institute,Shantou University Medical College,Shantou 515031,Guangdong Province,ChinaShao-Heng He,Immunopharmacology Group,University of Southampton,Southampton,UK.  World Journal of Gastroenterology. 2004(03)
[2]Non-invasive investigation of inflammatory bowel disease[J]. JA Tibble,IBjarnason.  World Journal of Gastroenterology. 2001(04)



本文编号：3115145