副猪嗜血杆菌OMP P2基因PCR检测方法的建立与四川地区HPs分子流行病学调查
发布时间：2021-04-03 06:39
副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌（Haemophilus Parasuis, HPs）引起猪的一种常见的细菌性疾病,该病在我国的流行越来越广泛,给我国养猪业造成了较大的经济损失,快速准确诊断和掌握流行病学规律对指导该病的防控非常重要。针对现有方法的不足,本研究建立了一种检测HPs的PCR方法,并运用该方法对四川地区HPs进行了分子流行病学调查,掌握了近期四川地区HPs的流行与分布、部分基因的分子进化特征,为四川地区开展该病的防控监测、流行风险分析、HPs基因数据库的建立及疫苗研制等奠定了基础。1.副猪嗜血杆菌0MP P2基因PCR检测方法的建立本研究参照Genbank公布的HPs外膜蛋白P2基因,选择其保守区域设计针对所有血清型HPs的PCR通用检测引物,通过对退火温度、引物浓度等条件的摸索优化,成功建立了PCR快速检测方法,将标准菌株HS80 PCR产物序列进行测定和比对,结果表明序列同源性达97%-99%,证明了该PCR方法对靶序列克隆的准确性。再以15个血清型的HPs标准菌株和链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、丹毒杆菌等7种参考菌株对该方法的特异性和重复性进行了验证,结果显示该方法特异性...
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1 病原概述
2 流行病学及致病机理
2.1 流行病学研究
2.2 致病机理研究
3 毒力因子研究
3.1 荚膜、菌毛等
3.2 外膜蛋白（OMP）
3.3 自转运蛋白
3.4 脂多糖（LSP）和脂寡糖（LOS）
3.5 其他潜在毒力因子
4 副猪嗜血杆菌的诊断
4.1 清学诊断
4.2 病原学诊断
5 副猪嗜血杆菌病的防治
6 研究的目的与意义
第二章 副猪嗜血杆菌OMP P2基因PCR检测方法的建立与应用
1 材料
1.1 试验菌株
1.2 主要试剂
1.3 主要设备
1.4 培养基及溶液配置
2 方法
2.1 PCR引物的设计
2.2 HPs标准株复苏
2.3 HPs纯度检测
2.4 细菌DNA模板提取
2.5 PCR反应条件的确立及PCR扩增
2.6 PCR产物回收纯化与测序鉴定
2.7 PCR特异性试验
2.8 PCR灵敏性试验
2.9 PCR方法的应用
3 结果
3.1 PCR反应条件的确立
3.2 重组质粒的PCR鉴定与测序
3.3 PCR的特异性测定
3.4 PCR的灵敏性测定
3.5 PCR方法的应用
4 分析与讨论
第三章 2013年四川地区HPs的分子流行病学调查
1 材料
1.1 病料
1.2 试验菌株
1.3 主要试剂及仪器设备
2 方法
2.1 病料处理
2.2 病料的PCR检测
2.3 HPs espp2基因引物的设计
2.4 espp2基因的扩增
2.5 PCR产物的回收纯化及克隆测序
2.6 HPs espp2基因序列分析
3 结果
3.1 病料采集
3.2 HPs分子流行病学调查结果
3.3 HPs espp2基因的扩增结果
3.4 重组质粒的PCR鉴定结果
3.5 espp2基因的测序结果
3.6 espp2基因同源性分析
3.7 espp2基因氨基酸序列同源性及差异位点比较分析
3.8 espp2基因系统进化树构建
4 讨论与分析
全文结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Establishment and Application of an Indirect ELISA for Detection on Antibody of Haemophilus parasuis[J]. ZHENG Nian-guang 1 ,LUO Man-ling 1,2 ,GAO Juan 1 ,HE Ling 2 ,XIA Fang 2 ,TAN Shi-yong 3 ,CHEN Rui-ai 1. South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China; 2. Guangdong Dahuanong Animal Health Products CO. LTD,Yunfu 527400,China; 3. Guangdong Hu’nongwenshi Animal Husbandry CO. LTD,Yunfu 527400,China. Animal Husbandry and Feed Science. 2012(02)
[2]副猪嗜血杆菌OMP P2基因PCR检测方法的建立与应用[J]. 李鹏,李军星,李玉峰,张国龙,宋艳华,王先炜,姜平. 中国兽医学报. 2010(10)
[3]副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用[J]. 冯小明,储岳峰,贺英,高鹏程,赵萍,郭晗,樊祜卿,逯忠新. 中国兽医科学. 2009(07)
[4]副猪嗜血杆菌病流行病学及致病因子的研究进展[J]. 薛国聪,任涛. 中国畜牧兽医. 2009(05)
[5]副猪嗜血杆菌血清5型间接血凝试验和间接ELISA抗体检测方法的建立[J]. 石碧,崔耀文,贾凡,金卉,万云,蔡旭旺,方刚,陈焕春,周锐. 中国兽医科学. 2007(11)
[6]我国部分地区副猪嗜血杆菌病的流行病学调查[J]. 尹秀凤,王艳,姜平. 畜牧与兽医. 2007(06)
[7]副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与应用[J]. 尹秀凤,王艳,姜平,李玉峰,蒋文明. 中国兽医学报. 2007(02)
[8]副猪嗜血杆菌抗体间接血凝检测方法的建立及应用[J]. 魏子贡,蔡旭旺,金梅林,胡军勇,葛君,陈焕春. 中国兽医科学. 2006(09)
[9]副猪嗜血杆菌分离鉴定与PCR检测方法的建立及应用[J]. 林雪玲,黄耿森,冼琼珍,黄良宗,顾万军. 吉林农业大学学报. 2006(03)
[10]副猪嗜血杆菌间接ELISA抗体检测方法的建立[J]. 王艳,夏万田,柏坤桃,尹秀凤,姜平. 畜牧与兽医. 2006(03)
硕士论文
[1]间接ELISA检测HPS抗体方法的改进与四川部分地区HPS的血清学调查[D]. 张亚成.四川农业大学 2011
[2]HPS自转运蛋白的免疫原性及其与宿主细胞相互作用研究[D]. 张玉娟.华中农业大学 2011
[3]副猪嗜血杆菌的病原学检测[D]. 王磊.华中农业大学 2006
本文编号：3116814
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1 病原概述
2 流行病学及致病机理
2.1 流行病学研究
2.2 致病机理研究
3 毒力因子研究
3.1 荚膜、菌毛等
3.2 外膜蛋白（OMP）
3.3 自转运蛋白
3.4 脂多糖（LSP）和脂寡糖（LOS）
3.5 其他潜在毒力因子
4 副猪嗜血杆菌的诊断
4.1 清学诊断
4.2 病原学诊断
5 副猪嗜血杆菌病的防治
6 研究的目的与意义
第二章 副猪嗜血杆菌OMP P2基因PCR检测方法的建立与应用
1 材料
1.1 试验菌株
1.2 主要试剂
1.3 主要设备
1.4 培养基及溶液配置
2 方法
2.1 PCR引物的设计
2.2 HPs标准株复苏
2.3 HPs纯度检测
2.4 细菌DNA模板提取
2.5 PCR反应条件的确立及PCR扩增
2.6 PCR产物回收纯化与测序鉴定
2.7 PCR特异性试验
2.8 PCR灵敏性试验
2.9 PCR方法的应用
3 结果
3.1 PCR反应条件的确立
3.2 重组质粒的PCR鉴定与测序
3.3 PCR的特异性测定
3.4 PCR的灵敏性测定
3.5 PCR方法的应用
4 分析与讨论
第三章 2013年四川地区HPs的分子流行病学调查
1 材料
1.1 病料
1.2 试验菌株
1.3 主要试剂及仪器设备
2 方法
2.1 病料处理
2.2 病料的PCR检测
2.3 HPs espp2基因引物的设计
2.4 espp2基因的扩增
2.5 PCR产物的回收纯化及克隆测序
2.6 HPs espp2基因序列分析
3 结果
3.1 病料采集
3.2 HPs分子流行病学调查结果
3.3 HPs espp2基因的扩增结果
3.4 重组质粒的PCR鉴定结果
3.5 espp2基因的测序结果
3.6 espp2基因同源性分析
3.7 espp2基因氨基酸序列同源性及差异位点比较分析
3.8 espp2基因系统进化树构建
4 讨论与分析
全文结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Establishment and Application of an Indirect ELISA for Detection on Antibody of Haemophilus parasuis[J]. ZHENG Nian-guang 1 ,LUO Man-ling 1,2 ,GAO Juan 1 ,HE Ling 2 ,XIA Fang 2 ,TAN Shi-yong 3 ,CHEN Rui-ai 1. South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China; 2. Guangdong Dahuanong Animal Health Products CO. LTD,Yunfu 527400,China; 3. Guangdong Hu’nongwenshi Animal Husbandry CO. LTD,Yunfu 527400,China. Animal Husbandry and Feed Science. 2012(02)
[2]副猪嗜血杆菌OMP P2基因PCR检测方法的建立与应用[J]. 李鹏,李军星,李玉峰,张国龙,宋艳华,王先炜,姜平. 中国兽医学报. 2010(10)
[3]副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用[J]. 冯小明,储岳峰,贺英,高鹏程,赵萍,郭晗,樊祜卿,逯忠新. 中国兽医科学. 2009(07)
[4]副猪嗜血杆菌病流行病学及致病因子的研究进展[J]. 薛国聪,任涛. 中国畜牧兽医. 2009(05)
[5]副猪嗜血杆菌血清5型间接血凝试验和间接ELISA抗体检测方法的建立[J]. 石碧,崔耀文,贾凡,金卉,万云,蔡旭旺,方刚,陈焕春,周锐. 中国兽医科学. 2007(11)
[6]我国部分地区副猪嗜血杆菌病的流行病学调查[J]. 尹秀凤,王艳,姜平. 畜牧与兽医. 2007(06)
[7]副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与应用[J]. 尹秀凤,王艳,姜平,李玉峰,蒋文明. 中国兽医学报. 2007(02)
[8]副猪嗜血杆菌抗体间接血凝检测方法的建立及应用[J]. 魏子贡,蔡旭旺,金梅林,胡军勇,葛君,陈焕春. 中国兽医科学. 2006(09)
[9]副猪嗜血杆菌分离鉴定与PCR检测方法的建立及应用[J]. 林雪玲,黄耿森,冼琼珍,黄良宗,顾万军. 吉林农业大学学报. 2006(03)
[10]副猪嗜血杆菌间接ELISA抗体检测方法的建立[J]. 王艳,夏万田,柏坤桃,尹秀凤,姜平. 畜牧与兽医. 2006(03)
硕士论文
[1]间接ELISA检测HPS抗体方法的改进与四川部分地区HPS的血清学调查[D]. 张亚成.四川农业大学 2011
[2]HPS自转运蛋白的免疫原性及其与宿主细胞相互作用研究[D]. 张玉娟.华中农业大学 2011
[3]副猪嗜血杆菌的病原学检测[D]. 王磊.华中农业大学 2006
本文编号：3116814
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3116814.html
