山羊卵巢褪黑素信号特异性载体pcDNA3.1-Pro/GDF9-ASMT与pcDNA3.1-Pro/Cyp17-MTNR

发布时间：2021-04-04 21:56

　　本研究旨在构建褪黑素（melatonin,MLT）合成酶乙酰血清素甲基转移酶（acetylserotonin methytransferase,ASMT）的卵母细胞特异表达载体GDF9-ASMT和MLT受体（MTNR1A与MTNR1B）的颗粒（黄体）细胞特异表达载体Cyp17-MTNR1A、MTNR1B,以期为进一步生产高繁殖力转基因山羊提供载体材料。首先,分别扩增出山羊生长分化因子9 （GDF9）与细胞色素P450家族17亚家族A成员1（Cyp17a1）启动子序列备用;然后,扩增ASMT、MTNR1A及MTNR1B基因CDS全长序列,并通过酶切将ASMT连接至GDF9启动子下游,将MTNR1A和MTNR1B连接至Cyp17a1启动子下游,制备出Pro/GDF9-ASMT、Pro/Cyp17-MTNR1A与Pro/Cyp17-MTNR1B表达元件;最后通过酶切连接将上述表达元件整合至pcDNA3.1（+）载体中,从而构建出pcDNA3.1-Pro/GDF9-ASMT、pcDNA3.1-Pro/Cyp17-MTNR1A和pcDNA3.1-Pro/Cyp17-MTNR1B真核表达载体。经测... 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(12)北大核心

【文章页数】：11 页

【部分图文】：

GDF9和Cyp17a1基因的组织表达谱分析

以山羊基因组为模板进行GDF9和Cyp17a1基因启动子的PCR扩增,PCR产物琼脂糖凝胶电泳显示,均在约2 500 bp处出现特异性条带,条带的大小与预期值(2 500 bp)符合(图2A、2B);经测序证实,扩增条带与GenBank数据库中GDF9和Cyp17a1基因启动子序列的碱基同源性均为98%(图2C、2D),这表明山羊GDF9和Cyp17a1基因启动子克隆成功。2.3 目的基因ASMT、MTNR1A、MTNR1B的PCR扩增及序列分析

以山羊松果体cDNA为模板,进行ASMT和MTNR1A、MTNR1B基因CDS序列的PCR扩增,PCR产物琼脂糖凝胶电泳显示,均在约1 100 bp处出现特异性条带,条带的大小与预期值(ASMT 1 038 bp,MTNR1A 1 101 bp和MTNR1B 1 131 bp)相近(图3A、3B)。经测序证实,扩增条带与GenBank数据库中ASMT、MTNR1A和MTNR1B基因的CDS序列碱基同源性分别为98%(图3C)、98%(图3D)和99%(图3E)。这表明目的基因ASMT、MTNR1A、MTNR1B的CDS序列克隆成功。2.4 pcDNA3.1(+)载体骨架的PCR扩增

【参考文献】：
期刊论文
[1]褪黑素在雌性动物繁殖中的调控作用[J]. 白欣洁,刘莎莎,王功民,刘紫薇,付静涛,韩亚楠.  中国兽医科学. 2020(07)
[2]利用Cre/LoxP系统删除转基因山羊体内的选择标记基因[J]. 兰翀,任丽娜,吴敏,刘思国,刘国辉,徐旭俊,陈建泉,马恒东,成国祥.  生物工程学报. 2013(12)
[3]山羊GDF9基因及其多态性分析研究进展[J]. 孟丽娜,张英杰,刘月琴.  中国草食动物科学. 2012(S1)
[4]我国肉羊产业发展中存在的问题及对策[J]. 李跻.  农业科学研究. 2010(03)
[5]生长分化因子9基因及其在生殖中的作用[J]. 吴泽辉,储明星,李学伟.  遗传. 2005(03)



本文编号：3118560