水貂阿留申病毒不同密度表位肽的串联表达研究

发布时间：2021-04-06 16:00

　　为比较含有水貂阿留申病毒（ADV）VP2蛋白不同表位密度重组蛋白的抗原性,本研究将抗原表位肽的编码序列进行2、4、6、8重复串联,得到4个表位串联体P2、P4、P6、P8,将其克隆到表达载体pET-30a（+）上,构建4个重组质粒,在大肠杆菌系统中诱导表达;经Western Blot和对流免疫电泳（CIEP）鉴定其抗原性。采用间接ELISA方法对各重组蛋白进行抗原性分析比较。结果显示,成功表达的3个重组蛋白PP4、PP6、PP8均具有良好的抗原性;8段表位肽串联的重组蛋白PP8的抗原性最强。本研究制备的串联重组蛋白为建立ADV血清学诊断方法提供了科学依据。 

【文章来源】：中国兽医杂志. 2020,56(03)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

8个表位肽串联体的DNA序列

SDS-PAGE结果显示,重组蛋白PP2未能成功表达。Western Blot结果显示,成功表达的3个重组蛋白大小符合预期,且均能够被抗ADV阳性血清所识别(见图4),同时这些重组蛋白不与抗ADV阴性血清反应。另外,CIEP结果显示,在商业抗原和3个重组蛋白与抗ADV阳性血清间均产生了肉眼可见的沉淀线,与抗ADV阴性血清间均未形成沉淀线。结果表明,3个重组蛋白均能与抗ADV阳性血清发生特异性反应,具有一定的抗原性。3.4 重组蛋白抗原性的ELISA分析

采用ELISA方法鉴定纯化后的重组蛋白PP4、PP6和PP8的抗原性,结果显示,3个重组蛋白与ADV阳性血清反应OD450值均在2.0左右,呈现阳性;与阴性血清反应的OD450值均在0.1左右,呈现阴性。图5为在3种不同质量浓度下3个重组蛋白的检测结果P/N值。在3个重组蛋白中PP8的P/N值最高,PP6次之,PP4最低。结果表明,重组蛋白PP8的抗原性最强。图5 ELISA比较不同抗原表位密度重组蛋白的抗原性

【参考文献】：
期刊论文
[1]猪传染性胃肠炎病毒S蛋白抗原表位C的串联表达研究[J]. 于天飞,董慧莹,张喜文,谢鹏宇,王有祺,孙婉姝.  中国预防兽医学报. 2017(11)
[2]牛病毒性腹泻病病毒NS3表位串联蛋白表达及抗体间接ELISA方法的建立[J]. 贾莹,李岩,尹鑫,温凯,刘华,张文龙,王君伟.  畜牧兽医学报. 2011(08)
[3]对表位生物学研究的认识和体会[J]. 朱锡华,吴玉章.  上海免疫学杂志. 1998(01)

硕士论文
[1]水貂阿留申病检测抗原的制备及间接ELISA检测方法的建立[D]. 黄盼盼.吉林大学 2015



本文编号：3121710