O型FMDV衣壳抗原酸稳定性位点及影响其高效表达区域的鉴定
发布时间：2021-04-06 19:41
口蹄疫（Foot and mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus,FMDV）引起的偶蹄动物的一种人兽共患传染病，可以导致被感染的家畜生产机能严重下降，相关畜产品品质不佳，并且严重影响畜产品及其相关产品的国际贸易，给国民经济带来巨大冲击。目前，对口蹄疫的防治主要是以灭活疫苗为主，但是随着防疫标准的不断提高，以及出于生物安全的考虑，传统疫苗暴露出了一系列的问题。因此，研制新型的基因工程疫苗显得异常重要。为鉴定O型FMDV衣壳抗原的耐酸稳定性相关位点，通过改变相关位点以提高衣壳抗原在家蚕杆状病毒表达系统（Bombyx mori baculovirorus expression system）中的表达量，最终研制基因亚单位疫苗。本研究利用PH6.0的PBS对FMDV O/ON/CHA/株进行酸化处理，经Tris（PH7.6）中和后，通过中性红蚀斑克隆技术得到两株耐酸性单克隆毒株S-A和S-B。将二者的P1基因与未酸化处理的原毒的P1基因进行序列比对，在编码衣壳蛋白的P1基因上发现4个突变位点，其中VP1的N17D和VP2的D...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
型FMDV基因组的分端扩增Fig.1AmplificationofOtypeFMDVgenomebyPCRM1:DL2000marker；1:392bp的片段N1；2:687bp的片段N2；3:3534bp的片段N3；4:3852bp的片段N4；M2：λ-EcoT14DNAMarker
图 2 两株 FMDV 感染 BHK-21 细胞Fig 2The BHK-21 cell infected by S-A and S-BA:阴性对照；B：S-A 株 FMDV 感染 BHK-21；C :S-B 株 FMDV 感染 BHK-21A:negative control；B:The BHK-21 cell infected by of FMDV S-A strain；C:The BHK-21 cell infected byof FMDV S-B strain2.3.3 酸化毒的 P1 片段的扩增根据应经测通的病毒基因组并结合 NCBI 查询结果，准确找出 P1 基因的起始点及终止点，用 DNAMAN 软件设计的一对引物扩增两株毒的 P1 基因，1% 的琼脂糖凝胶检测显示，两株毒都可以准确的检测到与目的片段大小相当，长 2208bp 的片段，将 PCR 回收产物分别连接到pMD18-T 上的阳性质粒送测序公司测序。
染 BHK-21 细胞 cell infected by S-A and S-BS-A 株 FMDV 感染 BHK-21；C :S-B 株 FMDV 感染 BHK-21rol；B:The BHK-21 cell infected by of FMDV S-A strain；C:The BHK-21ain的 P1 片段的扩增通的病毒基因组并结合 NCBI 查询结果，准确找出 P1 基因的起软件设计的一对引物扩增两株毒的 P1 基因，1% 的琼脂糖凝胶检检测到与目的片段大小相当，长 2208bp 的片段，将 PCR 回收阳性质粒送测序公司测序。
【参考文献】：
期刊论文
[1]口蹄疫及其防控技术[J]. 郑海学,何继军,郭建宏,刘湘涛. 兽医导刊. 2012(12)
[2]猪口蹄疫的流行与防控[J]. 陈世平. 今日养猪业. 2012(05)
[3]通过耐酸性改造在昆虫细胞中组装FMDV空衣壳结构[J]. 曹轶梅,卢曾军,孙甲川,孙普,郭建宏,刘在新. 中国农业科学. 2009(03)
[4]口蹄疫病毒3C蛋白酶的研究进展[J]. 周建华,常惠芸. 中国人兽共患病学报. 2008(11)
[5]H5亚型禽流感病毒HA基因在重组杆状病毒中的表达及检测[J]. 费东亮,金宁一,马鸣潇,夏志平,鲁会军,金扩世. 中国兽医学报. 2006(04)
[6]利用昆虫杆状病毒表达SARS冠状病毒的刺突蛋白和膜蛋白[J]. 贾世海,周博,吴峻,李木旺,潘敏慧,鲁成,苗雪霞,黄勇平. 细胞生物学杂志. 2006(01)
[7]口蹄疫病毒抗原位点研究进展[J]. 吴海波,邵军军,常惠芸. 动物医学进展. 2005(09)
[8]杆状病毒表达SARS冠状病毒核蛋白抗原性的研究[J]. 胡森,王喜军,王清华,吴东来,邓国华,王笑梅,步志高. 中国人兽共患病杂志. 2005(04)
[9]昆虫杆状病毒基因工程研究新进展[J]. 洪靖君,段家龙. 生物技术. 2002(01)
[10]抑癌基因p16INK4真核表达载体的构建及其表达[J]. 朱长军,张利宁,马春红,曹英林,孙汶生. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2000(01)
本文编号：3122017
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
型FMDV基因组的分端扩增Fig.1AmplificationofOtypeFMDVgenomebyPCRM1:DL2000marker；1:392bp的片段N1；2:687bp的片段N2；3:3534bp的片段N3；4:3852bp的片段N4；M2：λ-EcoT14DNAMarker
图 2 两株 FMDV 感染 BHK-21 细胞Fig 2The BHK-21 cell infected by S-A and S-BA:阴性对照；B：S-A 株 FMDV 感染 BHK-21；C :S-B 株 FMDV 感染 BHK-21A:negative control；B:The BHK-21 cell infected by of FMDV S-A strain；C:The BHK-21 cell infected byof FMDV S-B strain2.3.3 酸化毒的 P1 片段的扩增根据应经测通的病毒基因组并结合 NCBI 查询结果，准确找出 P1 基因的起始点及终止点，用 DNAMAN 软件设计的一对引物扩增两株毒的 P1 基因，1% 的琼脂糖凝胶检测显示，两株毒都可以准确的检测到与目的片段大小相当，长 2208bp 的片段，将 PCR 回收产物分别连接到pMD18-T 上的阳性质粒送测序公司测序。
染 BHK-21 细胞 cell infected by S-A and S-BS-A 株 FMDV 感染 BHK-21；C :S-B 株 FMDV 感染 BHK-21rol；B:The BHK-21 cell infected by of FMDV S-A strain；C:The BHK-21ain的 P1 片段的扩增通的病毒基因组并结合 NCBI 查询结果，准确找出 P1 基因的起软件设计的一对引物扩增两株毒的 P1 基因，1% 的琼脂糖凝胶检检测到与目的片段大小相当，长 2208bp 的片段，将 PCR 回收阳性质粒送测序公司测序。
【参考文献】：
期刊论文
[1]口蹄疫及其防控技术[J]. 郑海学,何继军,郭建宏,刘湘涛. 兽医导刊. 2012(12)
[2]猪口蹄疫的流行与防控[J]. 陈世平. 今日养猪业. 2012(05)
[3]通过耐酸性改造在昆虫细胞中组装FMDV空衣壳结构[J]. 曹轶梅,卢曾军,孙甲川,孙普,郭建宏,刘在新. 中国农业科学. 2009(03)
[4]口蹄疫病毒3C蛋白酶的研究进展[J]. 周建华,常惠芸. 中国人兽共患病学报. 2008(11)
[5]H5亚型禽流感病毒HA基因在重组杆状病毒中的表达及检测[J]. 费东亮,金宁一,马鸣潇,夏志平,鲁会军,金扩世. 中国兽医学报. 2006(04)
[6]利用昆虫杆状病毒表达SARS冠状病毒的刺突蛋白和膜蛋白[J]. 贾世海,周博,吴峻,李木旺,潘敏慧,鲁成,苗雪霞,黄勇平. 细胞生物学杂志. 2006(01)
[7]口蹄疫病毒抗原位点研究进展[J]. 吴海波,邵军军,常惠芸. 动物医学进展. 2005(09)
[8]杆状病毒表达SARS冠状病毒核蛋白抗原性的研究[J]. 胡森,王喜军,王清华,吴东来,邓国华,王笑梅,步志高. 中国人兽共患病杂志. 2005(04)
[9]昆虫杆状病毒基因工程研究新进展[J]. 洪靖君,段家龙. 生物技术. 2002(01)
[10]抑癌基因p16INK4真核表达载体的构建及其表达[J]. 朱长军,张利宁,马春红,曹英林,孙汶生. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2000(01)
本文编号：3122017
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