大片形吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的特性研究及其抑制物的筛选
发布时间：2021-04-07 17:11
片形吸虫病是由大片形吸虫和肝片形吸虫寄生在草食性哺乳动物或人的肝胆内引起的一种人畜共患寄生虫病。硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶（TGR）是片形吸虫氧化还原系统中一个非常重要的抗氧化酶,TGR抑制物的研究和筛选可为研发抗大片形吸虫的新药物提供理论依据。本研究利用PCR技术从大片形吸虫cDNA中扩增得到FgTGR基因,并将细菌的硒代半胱氨酸插入元件（SECIS）融合到FgTGR的开放阅读框末端,形成嵌合基因FgTGR-SECIS,构建FgTGR的重组原核表达质粒pET-28a（+）-FgTGRsec,将重组质粒转化至BL21（DE3）感受态细胞进行诱导表达得到重组蛋白rFgTGR。将重组质粒与硒蛋白表达工程质粒pSUABC共转化至BL21（DE3）感受态细胞进行诱导表达,在表达过程中添加亚硒酸钠和L-半胱氨酸,得到重组硒蛋白（rFgTGRsec）。通过His-tag蛋白纯化磁珠分别对两种蛋白进行纯化。建立了rFgTGRsec的TrxR、GR、GrxR三种酶活性检测体系,通过测定DTNB和NADPH的吸光值变化,分别计算rFgTGRsec的TrxR、GR和GrxR活性。在金属催化氧化系统（MCO）...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
FgTGR与FgTGR-SECIS基因的克隆
中国农业科学院硕士学位论文第二章大片形吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的表达纯化19图2-2菌落PCR鉴定泳道1-10：单克隆菌落PCR结果M：DNAmarker（2000bp）Fig.2-2PCRidentificationofbacterialcoloniesLane1-10:PCRproductofbacterialcolonies;M:DNAmarker（2000bp）如图2-3所示，质粒pET28a(+)-FgTGR-SECIS经过酶切后在电泳图中显示两条条带。图2-3质粒pET28a(+)-FgTGR-SECIS的酶切鉴定泳道1：完整质粒；泳道2-5：酶切后的质粒；M：DNAmarker（10,000bp）Fig.2-3IdentificationoftherecombinantplasmidpET28a(+)-FgTGR-SECISbyrestrictionenzymedigestLane1:Plasmidwithoutenzymedigestion;Lane2-5:Productsofrestrictionenzymedigestion;M:DNAmarker（10,000bp）
中国农业科学院硕士学位论文第二章大片形吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的表达纯化19图2-2菌落PCR鉴定泳道1-10：单克隆菌落PCR结果M：DNAmarker（2000bp）Fig.2-2PCRidentificationofbacterialcoloniesLane1-10:PCRproductofbacterialcolonies;M:DNAmarker（2000bp）如图2-3所示，质粒pET28a(+)-FgTGR-SECIS经过酶切后在电泳图中显示两条条带。图2-3质粒pET28a(+)-FgTGR-SECIS的酶切鉴定泳道1：完整质粒；泳道2-5：酶切后的质粒；M：DNAmarker（10,000bp）Fig.2-3IdentificationoftherecombinantplasmidpET28a(+)-FgTGR-SECISbyrestrictionenzymedigestLane1:Plasmidwithoutenzymedigestion;Lane2-5:Productsofrestrictionenzymedigestion;M:DNAmarker（10,000bp）
【参考文献】：
期刊论文
[1]大理地区大片形吸虫的最适中间宿主研究[J]. 方文,李天美,李婷,张剑萍,郝明明,刘榆华,陈绍荣. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2019(03)
[2]肝片吸虫病药物治疗的研究进展[J]. 王超,宋正己. 中国热带医学. 2019(03)
[3]阿苯达唑片与吡喹酮片治疗肝吸虫的临床疗效和副作用分析[J]. 韦肖龙,谭瑞斌. 现代医学与健康研究电子杂志. 2018(13)
[4]三氯苯达唑的国内外研究与应用现状[J]. 李成应,焦伟丽,温锦芳. 中国畜牧兽医文摘. 2017(05)
[5]羊肝片吸虫病药物防治模式试验探讨[J]. 李文彩,罗生金. 中兽医学杂志. 2015(05)
[6]肝片形吸虫对牛的危害和防治措施[J]. 赵立权,赵克平,杨忠宝. 当代畜牧. 2015(24)
[7]原核表达系统中硒代半胱氨酸表达效率的检测[J]. 张磊,李大鹏,许会静,李艳. 中国西部科技. 2015(01)
[8]大理地区肝片形吸虫感染中间宿主实验研究[J]. 方文,李天美,李科荣,陈凤,刘榆华. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2014(04)
[9]阿苯达唑和三氯苯哒唑对人体大片形吸虫的驱虫效果比较[J]. 方文,陈凤,刘宏坤,杨琼,杨琳. 中国血吸虫病防治杂志. 2014(01)
[10]金诺芬抗日本血吸虫活性机制及其细胞毒性的探讨[J]. 刘建,胡薇,徐斌,王吉鹏,王树奇,王小宁. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2012(06)
博士论文
[1]硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶（TGR）在日本血吸虫生长发育中部分功能的研究[D]. 韩艳辉.南京农业大学 2014
硕士论文
[1]Furoxan衍生物抑制日本血吸虫TGR活性及杀虫作用研究[D]. 郭晴晴.山东大学 2019
[2]以血吸虫TGR为靶标的呋咱衍生物以及青蒿素—呋咱类化合物的设计与合成[D]. 李恭铭.山东大学 2018
[3]金诺芬对斑马鱼胚胎的发育毒性研究[D]. 高晓艳.延边大学 2017
[4]基于SjTGR蛋白酶活性的抗血吸虫抑制剂研究[D]. 黄符燕.赣南师范学院 2015
[5]猪带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶的原核表达及其生物学特性分析[D]. 尹才.甘肃农业大学 2014
[6]日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的表达及其功能研究[D]. 宋丽君.江苏省血吸虫病防治研究所 2011
本文编号：3123858
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
FgTGR与FgTGR-SECIS基因的克隆
中国农业科学院硕士学位论文第二章大片形吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的表达纯化19图2-2菌落PCR鉴定泳道1-10：单克隆菌落PCR结果M：DNAmarker（2000bp）Fig.2-2PCRidentificationofbacterialcoloniesLane1-10:PCRproductofbacterialcolonies;M:DNAmarker（2000bp）如图2-3所示，质粒pET28a(+)-FgTGR-SECIS经过酶切后在电泳图中显示两条条带。图2-3质粒pET28a(+)-FgTGR-SECIS的酶切鉴定泳道1：完整质粒；泳道2-5：酶切后的质粒；M：DNAmarker（10,000bp）Fig.2-3IdentificationoftherecombinantplasmidpET28a(+)-FgTGR-SECISbyrestrictionenzymedigestLane1:Plasmidwithoutenzymedigestion;Lane2-5:Productsofrestrictionenzymedigestion;M:DNAmarker（10,000bp）
中国农业科学院硕士学位论文第二章大片形吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的表达纯化19图2-2菌落PCR鉴定泳道1-10：单克隆菌落PCR结果M：DNAmarker（2000bp）Fig.2-2PCRidentificationofbacterialcoloniesLane1-10:PCRproductofbacterialcolonies;M:DNAmarker（2000bp）如图2-3所示，质粒pET28a(+)-FgTGR-SECIS经过酶切后在电泳图中显示两条条带。图2-3质粒pET28a(+)-FgTGR-SECIS的酶切鉴定泳道1：完整质粒；泳道2-5：酶切后的质粒；M：DNAmarker（10,000bp）Fig.2-3IdentificationoftherecombinantplasmidpET28a(+)-FgTGR-SECISbyrestrictionenzymedigestLane1:Plasmidwithoutenzymedigestion;Lane2-5:Productsofrestrictionenzymedigestion;M:DNAmarker（10,000bp）
【参考文献】：
期刊论文
[1]大理地区大片形吸虫的最适中间宿主研究[J]. 方文,李天美,李婷,张剑萍,郝明明,刘榆华,陈绍荣. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2019(03)
[2]肝片吸虫病药物治疗的研究进展[J]. 王超,宋正己. 中国热带医学. 2019(03)
[3]阿苯达唑片与吡喹酮片治疗肝吸虫的临床疗效和副作用分析[J]. 韦肖龙,谭瑞斌. 现代医学与健康研究电子杂志. 2018(13)
[4]三氯苯达唑的国内外研究与应用现状[J]. 李成应,焦伟丽,温锦芳. 中国畜牧兽医文摘. 2017(05)
[5]羊肝片吸虫病药物防治模式试验探讨[J]. 李文彩,罗生金. 中兽医学杂志. 2015(05)
[6]肝片形吸虫对牛的危害和防治措施[J]. 赵立权,赵克平,杨忠宝. 当代畜牧. 2015(24)
[7]原核表达系统中硒代半胱氨酸表达效率的检测[J]. 张磊,李大鹏,许会静,李艳. 中国西部科技. 2015(01)
[8]大理地区肝片形吸虫感染中间宿主实验研究[J]. 方文,李天美,李科荣,陈凤,刘榆华. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2014(04)
[9]阿苯达唑和三氯苯哒唑对人体大片形吸虫的驱虫效果比较[J]. 方文,陈凤,刘宏坤,杨琼,杨琳. 中国血吸虫病防治杂志. 2014(01)
[10]金诺芬抗日本血吸虫活性机制及其细胞毒性的探讨[J]. 刘建,胡薇,徐斌,王吉鹏,王树奇,王小宁. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2012(06)
博士论文
[1]硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶（TGR）在日本血吸虫生长发育中部分功能的研究[D]. 韩艳辉.南京农业大学 2014
硕士论文
[1]Furoxan衍生物抑制日本血吸虫TGR活性及杀虫作用研究[D]. 郭晴晴.山东大学 2019
[2]以血吸虫TGR为靶标的呋咱衍生物以及青蒿素—呋咱类化合物的设计与合成[D]. 李恭铭.山东大学 2018
[3]金诺芬对斑马鱼胚胎的发育毒性研究[D]. 高晓艳.延边大学 2017
[4]基于SjTGR蛋白酶活性的抗血吸虫抑制剂研究[D]. 黄符燕.赣南师范学院 2015
[5]猪带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶的原核表达及其生物学特性分析[D]. 尹才.甘肃农业大学 2014
[6]日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的表达及其功能研究[D]. 宋丽君.江苏省血吸虫病防治研究所 2011
本文编号：3123858
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