三种禽病毒抗原的串联表达、纯化及活性鉴定

发布时间：2021-04-10 04:40

　　为实现多个基因在同一菌株中均一可溶性表达,简化基因工程亚单位多联多价疫苗中抗原生产的工艺步骤,本研究选用Ⅰ群4型禽腺病毒（FAdV-4） Fiber-2蛋白、鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV） VP2蛋白和减蛋综合征病毒（EDSV）Fiber蛋白3种来自不同禽病毒的抗原为研究对象,利用原核表达系统,通过密码子优化、载体启动子改造和基因串联顺序优化,获得单一载体/多重转录单元的共表达重组质粒。将共表达重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）菌株,进行3个基因的共表达。纯化后的蛋白进行Western blotting和蛋白活性检测。结果表明,目的基因经过密码子优化、载体启动子改造和基因串联顺序的优化后,获得均一可溶性共表达的3种蛋白,纯化后蛋白纯度大于80%,Western blotting分析和琼脂扩散试验表明串联表达的3种蛋白具有免疫反应性和抗原活性。文中通过目的基因密码子优化、表达载体启动子改造和基因串联等关键技术的突破,首次实现了3种不同禽病毒抗原的高效、均一、可溶性串联表达和纯化,为基因工程亚单位多联多价疫苗的研制奠定了基础。 

【文章来源】：生物工程学报. 2020,36(10)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

优化前后重组蛋白表达的SDS-PAGE分析

将含有6种不同串联顺序重组载体(图2)的E.coli BL21(DE3)同时培养，并用相同的诱导条件，诱导目的蛋白表达。破碎后样品上清用12%SDS-PAGE检测结果见图3。结果显示，不同串联顺序中FAd V Fiber-2蛋白、IBDV VP2蛋白和EDSV Fiber蛋白的可溶性表达情况差异比较明显。其中，含有串联表达重组载体p ET28a-F-E-I、p ET28a-E-I-F、p ET28a-E-F-I和p ET28a-I-E-F的菌株能够实现3种蛋白同时可溶性共表达(第2、4、5、6泳道)，含有串联表达重组载体p ET28aF-I-E和p ET28a-I-F-E的菌株仅能实现FAd V Fiber-2蛋白和IBDV VP2蛋白的同时可溶性表达(第3、7泳道)。图3 共表达蛋白的SDS-PAGE分析

图2 串联表达质粒的构建使用灰度扫描软件对上清中3种可溶性表达蛋白进行分析，分析结果显示，第6泳道中，3种蛋白的比例接近1︰1︰1，说明含有串联表达重组载体p ET28a-I-E-F的菌株，能够获得的可溶性表达相对较多，且比例接近目的蛋白。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3128978