磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的制备及其免疫检测方法的初步建立
发布时间：2021-04-11 21:06
磺胺二甲嘧啶（Sulfamethazine，SM2），属于磺胺类药物（Sulfonamides，SAs）中应用比较广泛的一种，含有对氨基苯磺酰胺的典型结构，SM2抑菌谱广，见效快，且成本低廉，广泛应用于动物疾病的预防和治疗。SM2还有促进动物生长的作用，因此，常作为饲料添加剂在动物生长过程中长期使用。SM2的过度使用会造成其在动物源性食品中大量残留，严重危害人类健康，引起了世界各国广泛的关注。因此，欧盟各国也对相关食品中的磺胺类药物的残留制定了最高允许值，规定总量不得高于100μg/kg，单个药物不得高于25μg/kg。日本对食品中的SAs规定不得检出。2002年12月我国农业部公告第235号文件规定在所有食品动物的肌肉、脂肪、肝和肾中磺胺类药物最高残留限量为100μg/kg，并将磺胺二甲嘧啶列为兽药残留监控的重点。目前，检测SM2的方法有微生物法，物理化学法以及酶联免疫检测法（ELISA）等。其中微生物法检测速度较快，但灵敏性和特异性差，物理化学法则存在样品前处理繁琐，需要昂贵仪器及专业操作等特点。酶联免疫检测法具有灵敏、快速、高通量的特点，不需要配备昂贵的的仪器，比较适合基层大量样...
【文章来源】：河北师范大学河北省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
磺胺类药物的母核结构
图 1.2 常见 14 中磺胺类药物结构1.1.2 磺胺类药物的作用机理磺胺类药物为广谱抑菌剂，结构上类似对氨基苯甲酸（Para aminobenzoicacid，PABA），作用机理如下：PABA 和二氢喋啶在二氢叶酸合成酶的作用下，合成二氢叶酸；二氢叶酸在二氢叶酸还原酶的作用下，又生成四氢叶酸；四氢叶酸再进一步形成活化型四氢叶酸，也就是辅酶Ｆ，它能传递一碳基团参与嘌呤、嘧啶核苷酸合成。磺胺类药物可与 PABA 竞争性地作用于细菌体内的二叶酸合成酶，阻碍了 PABA 作为原料合成细菌所需叶酸的过程，影响细菌核蛋白的合成，抑制细菌的生长繁殖。1.2 磺胺二甲嘧啶残留现状及危害1.2.1 磺胺二甲嘧啶在机体内的代谢SM2 进入动物体内后，肠道难吸收的主要以原形随粪便排出，而且在环境中
图1 SM2-BSA的合成路线图2.3.2 人工合成抗原的鉴定2.3.2.1 偶联物蛋白浓度测定采用考马斯亮蓝法测定BSA-SM2和OVA-SM2的蛋白浓度，以BSA不同浓度下对应的吸光度作图，以蛋白含量（μg）为横坐标，以吸光度值（Abmax）为纵坐标，绘制标准曲线，测定合成的BSA-SM2和OVA-SM2的蛋白浓度。2.3.2.2 半抗原与蛋白偶联比率的测定具体步骤如下，以BSA-SM2为例：①称量140μgSM2，稀释为1mL，然后倍比稀释得2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625mg/ml系列浓度，分别进行紫外光谱扫描；②读出不同浓度下对应的吸光度Abmax，以浓度为横坐标，对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线；③将2.5mg/ml的BSA倍比稀释，分别进行紫外光谱扫描；④读出不同浓度下对应的吸光度Abmax，作BSA浓度对吸光度的标准曲线；⑤将合成物SM2-BSA原液稀释10倍后，测定其UV图谱，得出吸光度 A0。⑥根据物质
【参考文献】：
期刊论文
[1]沙丁胺醇单克隆抗体的制备及间接ELISA方法的建立[J]. 彭述辉,袁利鹏,孙远明,雷红涛,王保玲,徐振林,庞杰. 食品工业科技. 2010(07)
[2]磺胺二甲嘧啶人工抗原的合成与鉴定[J]. 张明洲,胡华军,华加宁,方结红,陈宗伦,俞晓平. 中国计量学院学报. 2009(04)
[3]磺胺二甲基嘧啶残留快速检测阻断ELISA试剂盒的研制及其性能测定[J]. 张改平,刘庆堂,邓瑞广,杨苏珍,李学伍,赵东,邢广旭. 中国预防兽医学报. 2009(01)
[4]磺胺二甲嘧啶竞争抑制ELISA法检测[J]. 王颖,刘阳,周立波,柳增善. 中国公共卫生. 2008(12)
[5]磺胺二甲基嘧啶人工抗原的合成及鉴定[J]. 刘庆堂,职爱民,张改平,邓瑞广,柴书军,赵东,杨继飞,陈现臣. 河南农业科学. 2008(02)
[6]动物组织中磺胺二甲嘧啶残留ELISA试剂盒研制[J]. 李平,周洪斌,朱金连,肖震,丁贵平,宓晓黎,李利东,袁建兴. 微生物学杂志. 2006(05)
[7]饲料中磺胺二甲嘧啶、磺胺六甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲恶唑的检测方法[J]. 姜兆兴,曹旭,李智瑾. 饲料工业. 2005(20)
[8]克伦特罗小分子半抗原偶联比率的测定方法研究[J]. 吕会田,乐加昌,陈存社. 中国饲料. 2005(07)
[9]高效液相色谱法测定牛奶中磺胺二甲嘧啶残留量的研究[J]. 蒋定国,杨大进,王竹天,方从容,王玉莲,文玉雪. 华南预防医学. 2004(02)
[10]高效液相色谱法测定鸡肉中磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噁唑[J]. 杨祖英,金社胜,刘文娟,王贵际. 卫生研究. 2003(06)
硕士论文
[1]磺胺类药物残留ELISA快速检测试剂盒的研制[D]. 刘百红.华中农业大学 2006
[2]克伦特罗单克隆抗体制备和残留ELISA检测方法及试剂盒研究[D]. 王帅兵.华中农业大学 2005
本文编号：3131958
【文章来源】：河北师范大学河北省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
磺胺类药物的母核结构
图 1.2 常见 14 中磺胺类药物结构1.1.2 磺胺类药物的作用机理磺胺类药物为广谱抑菌剂，结构上类似对氨基苯甲酸（Para aminobenzoicacid，PABA），作用机理如下：PABA 和二氢喋啶在二氢叶酸合成酶的作用下，合成二氢叶酸；二氢叶酸在二氢叶酸还原酶的作用下，又生成四氢叶酸；四氢叶酸再进一步形成活化型四氢叶酸，也就是辅酶Ｆ，它能传递一碳基团参与嘌呤、嘧啶核苷酸合成。磺胺类药物可与 PABA 竞争性地作用于细菌体内的二叶酸合成酶，阻碍了 PABA 作为原料合成细菌所需叶酸的过程，影响细菌核蛋白的合成，抑制细菌的生长繁殖。1.2 磺胺二甲嘧啶残留现状及危害1.2.1 磺胺二甲嘧啶在机体内的代谢SM2 进入动物体内后，肠道难吸收的主要以原形随粪便排出，而且在环境中
图1 SM2-BSA的合成路线图2.3.2 人工合成抗原的鉴定2.3.2.1 偶联物蛋白浓度测定采用考马斯亮蓝法测定BSA-SM2和OVA-SM2的蛋白浓度，以BSA不同浓度下对应的吸光度作图，以蛋白含量（μg）为横坐标，以吸光度值（Abmax）为纵坐标，绘制标准曲线，测定合成的BSA-SM2和OVA-SM2的蛋白浓度。2.3.2.2 半抗原与蛋白偶联比率的测定具体步骤如下，以BSA-SM2为例：①称量140μgSM2，稀释为1mL，然后倍比稀释得2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625mg/ml系列浓度，分别进行紫外光谱扫描；②读出不同浓度下对应的吸光度Abmax，以浓度为横坐标，对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线；③将2.5mg/ml的BSA倍比稀释，分别进行紫外光谱扫描；④读出不同浓度下对应的吸光度Abmax，作BSA浓度对吸光度的标准曲线；⑤将合成物SM2-BSA原液稀释10倍后，测定其UV图谱，得出吸光度 A0。⑥根据物质
【参考文献】：
期刊论文
[1]沙丁胺醇单克隆抗体的制备及间接ELISA方法的建立[J]. 彭述辉,袁利鹏,孙远明,雷红涛,王保玲,徐振林,庞杰. 食品工业科技. 2010(07)
[2]磺胺二甲嘧啶人工抗原的合成与鉴定[J]. 张明洲,胡华军,华加宁,方结红,陈宗伦,俞晓平. 中国计量学院学报. 2009(04)
[3]磺胺二甲基嘧啶残留快速检测阻断ELISA试剂盒的研制及其性能测定[J]. 张改平,刘庆堂,邓瑞广,杨苏珍,李学伍,赵东,邢广旭. 中国预防兽医学报. 2009(01)
[4]磺胺二甲嘧啶竞争抑制ELISA法检测[J]. 王颖,刘阳,周立波,柳增善. 中国公共卫生. 2008(12)
[5]磺胺二甲基嘧啶人工抗原的合成及鉴定[J]. 刘庆堂,职爱民,张改平,邓瑞广,柴书军,赵东,杨继飞,陈现臣. 河南农业科学. 2008(02)
[6]动物组织中磺胺二甲嘧啶残留ELISA试剂盒研制[J]. 李平,周洪斌,朱金连,肖震,丁贵平,宓晓黎,李利东,袁建兴. 微生物学杂志. 2006(05)
[7]饲料中磺胺二甲嘧啶、磺胺六甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲恶唑的检测方法[J]. 姜兆兴,曹旭,李智瑾. 饲料工业. 2005(20)
[8]克伦特罗小分子半抗原偶联比率的测定方法研究[J]. 吕会田,乐加昌,陈存社. 中国饲料. 2005(07)
[9]高效液相色谱法测定牛奶中磺胺二甲嘧啶残留量的研究[J]. 蒋定国,杨大进,王竹天,方从容,王玉莲,文玉雪. 华南预防医学. 2004(02)
[10]高效液相色谱法测定鸡肉中磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噁唑[J]. 杨祖英,金社胜,刘文娟,王贵际. 卫生研究. 2003(06)
硕士论文
[1]磺胺类药物残留ELISA快速检测试剂盒的研制[D]. 刘百红.华中农业大学 2006
[2]克伦特罗单克隆抗体制备和残留ELISA检测方法及试剂盒研究[D]. 王帅兵.华中农业大学 2005
本文编号：3131958
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