地衣芽孢杆菌噬菌体的侵染能力及抗性菌株的诱变筛选

发布时间：2021-04-12 03:18

　　地衣芽孢杆菌是饲料上常用的益生菌之一,在地衣芽孢杆菌发酵生产中噬菌体的感染现象非常普遍。本文对地衣芽孢杆菌噬菌体性状以及抗噬菌体菌株的诱变筛选进行了研究。得到如下结果：（1）通过分离纯化,从地衣芽孢杆菌菌粉中得到2种噬菌体,命名为DB01和DB02,两种噬菌体对三株地衣芽孢杆菌TC侵染能力弱,宿主专一性强。经纯化培养后噬菌体的浓度最高达109pfu/mL以上。（2）研究了生产环境噬菌体的分布及杀灭方法。生产工厂的土壤、空气、尘埃中地衣芽孢杆菌噬菌体平均含量分别达到1.7×105pfu/g、2.9×103pfu/g、6.0×104pfu/g,种类丰富。100℃湿热处理5min不能完全杀灭噬菌体;1.4%漂白粉在实验室可完全杀灭噬菌体,工厂使用2%漂白粉消毒,仍有极少量噬菌体存活。（3）研究了噬菌体和温度对地衣芽孢杆菌的影响。菌体长得越好,噬菌体的数量越少。噬菌体污染严重时,菌数只能维持在50亿左右。北海从三月到到七月平均气温从19℃到34℃,平均气温28℃为临界点,高于临界点菌数可维持在100亿以上。（4）研究了紫外线+亚甲基胍复合诱变条件。紫外线：20w紫外灯,距离40cm,照射3mm... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 噬菌体定义
    1.2 噬菌体分类
        1.2.1 烈性噬菌体和温和噬菌体
        1.2.2 按照噬菌体的核酸类型分类
    1.3 噬菌体侵染过程和细菌的噬菌体防御体系
        1.3.1 噬菌体侵染细菌的过程
    1.4 噬菌体的防御体系
        1.4.1 常见的噬菌体防御体系
        1.4.2 CASS-噬菌体的新防御体系
    1.5 噬菌体对发酵工业危害
    1.6 抗噬菌体污染的措施
        1.6.1 预防措施
        1.6.2 感染噬菌体后的处理办法
    1.7 地衣芽孢杆菌应用
    1.8 地衣芽孢杆菌的发酵工艺
        1.8.1 地衣芽孢杆菌的固体发酵
        1.8.2 地衣芽孢杆菌的液体发酵
    1.9 抗噬菌体菌株筛选的研究进展
    1.10 本研究的目的
    技术路线
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株和噬菌体
        2.1.2 培养基
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器
    2.2 方法
        2.2.1 噬菌体的分离纯化及原液制备
        2.2.2 噬菌体效价测定
        2.2.3 互染实验
        2.2.4 环境抽样检测：土壤、尘埃、积水和空气
        2.2.5 杀灭环境中的噬菌体
        2.2.6 噬菌体和温度对芽孢杆菌生长的影响的测定方法
        2.2.7 地衣芽孢杆菌的亚甲基胍诱变育种方法
        2.2.8 双层琼脂筛选法
        2.2.9 复合诱变方法
        2.2.10 梯度筛选培养基制作方法
        2.2.11 测菌株的生长曲线方法
        2.2.12 传代对比测试方法
        2.2.13 生长能力的检测方法
3 结果与分析
    3.1 地衣芽孢杆菌噬菌体分离纯化及性状研究
        3.1.1 地衣芽孢杆菌噬菌体分离纯化
        3.1.2 地衣芽孢杆菌噬菌体效价
        3.1.3 地衣芽孢杆菌噬菌体生长水平
        3.1.4 噬菌体对枯草芽孢杆菌的交叉感染能力
    3.2 地衣芽孢杆菌各株系的噬菌体抗性
    3.3 生产环境噬菌体检测结果
        3.3.1 土壤中噬菌体分析
        3.3.2 尘埃中噬菌体分析
        3.3.3 积水中噬菌体分析
        3.3.4 消毒前后噬菌体分析
    3.4 噬菌体杀灭试验
        3.4.1 水浴杀灭噬菌体
        3.4.2 漂白粉对噬菌体的死灭效果
    3.5 噬菌体和温度对芽孢杆菌生长的影响
        3.5.1 地衣芽孢杆菌菌体与噬菌体的关系
        3.5.2 地衣芽孢杆菌菌数与温度的关系
    3.6 亚甲基胍诱变条件选择和诱变的结果
        3.6.1 不同浓度亚甲基胍处理出发菌株
        3.6.2 相同浓度亚甲基胍处理出发菌株不同时间
        3.6.3 亚甲基胍单一因素诱变结果
    3.7 复合诱变中紫外线照射的条件
    3.8 复合诱变筛选的菌株
        3.8.1 复合诱变实验结果
        3.8.2 稳定性检测
        3.8.3 诱变菌株的传代直径
    3.9 抗性菌株效价的提高
        3.9.1 抗性菌株的抗性
        3.9.2 抗性菌株抗性提高后的抗性
    3.10 抗性菌株遗传稳定性的提高和生产能力
        3.10.1 菌株的生长曲线
        3.10.2 菌株的传代对比
        3.10.3 生长能力的测试结果
4 结论与讨论
    4.1 噬菌体性状的研究
    4.2 对多种噬菌体感染的菌株选用诱变方法
        4.2.1 常用的诱变方法
        4.2.2 选择诱变方法
    4.3 工厂噬菌体污染
        4.3.1 噬菌体污染途径
        4.3.2 环境消毒和空气净化
    4.4 筛选是诱变育种的关键
        4.4.1 筛选方法的选择
        4.4.2 遗传稳定性和生产能力
    4.5 展望
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]嗜热链球菌抗噬菌体菌株的选育[J]. 冷一非,赵述淼,朱辉,梁运祥.  中国酿造. 2010(07)
[2]耐热α-淀粉酶产生菌枯草芽孢杆菌抗噬菌体的选育[J]. 张建宁.  安徽农业科学. 2009(12)
[3]2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌Ac9抗噬菌体菌株的选育[J]. 杨庆文,彭晓光,杨林娥,丁玉华,杨宇霞,韩建欣,吴光明.  科学技术与工程. 2009(05)
[4]抗噬菌体嗜热链球菌突变菌株Streptococcus thermophilus-21UD的选育[J]. 李亚蕾,杨波,李文霞,范艳丽.  食品工业科技. 2008(11)
[5]二氧化氯消毒剂杀菌及消毒效果观察[J]. 陈卫团,王希提,武传珍.  中国初级卫生保健. 2007(08)
[6]出血性大肠杆菌噬菌体933W的分离鉴定和保存[J]. 陈萍,沈明浩,王平.  中国兽药杂志. 2007(06)
[7]噬菌体MS2和φX174的双层琼脂平板和液体培养基扩增方法的建立[J]. 王秋英,赵炳梓,张佳宝,王一明,张辉,陈效民,龚建东.  土壤. 2007(02)
[8]鸡致病性大肠杆菌噬菌体的分离[J]. 邹玲,唐栋,刘文华,任慧英.  中国畜牧兽医. 2007(03)
[9]噬菌体与病毒对常用消毒处理的抗力比较研究[J]. 何静芳,沈伟,马伟,陈泰尧,王臻,张曦.  中国消毒学杂志. 2007(02)
[10]复合诱变选育林肯霉素高产菌株[J]. 丁琳.  氨基酸和生物资源. 2006(04)

博士论文
[1]乳杆菌噬菌体的分离、功能基因表达及抗噬菌体菌株的选育[D]. 王绍花.山东大学 2010



本文编号：3132506