传染性法氏囊病毒VP2蛋白的原核表达及其免疫效果评价

发布时间：2021-04-12 08:43

　　为提高原核表达传染性法氏囊病毒（IBDV）VP2蛋白纯度,在大肠杆菌中表达VP2蛋白,并对其进行纯化方法优化及其免疫原性分析。利用琼脂扩散试验（AGP）测定VP2蛋白效价并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定;采用饱和硫酸铵溶液和离子交换层析对目的蛋白进行纯化,并对纯化填料、洗脱液离子强度及缓冲液的pH值进行优化,以确定最佳纯化条件。将纯化的VP2蛋白免疫SPF鸡,定期采血用ELISA方法测定其免疫抗体并进行病理组织检测。SDS-PAGE及Western blot鉴定结果显示,VP2分子质量约为50 ku,且具有良好反应原性,VP2蛋白可溶性表达的AGP效价为1∶16。纯化结果显示,利用强阴离子层析优化盐离子浓度及pH值可获得纯度较高的VP2蛋白,其质量浓度为0.6 mg/mL。纯化的VP2蛋白加商业佐剂免疫鸡28 d后,鸡产生的特异性免疫抗体滴度最高,且攻毒后的保护率可达到80%,法氏囊无明显病理组织损伤。综上,利用大肠杆菌成功表达了VP2蛋白,纯化的VP2蛋白纯度较高且具有良好的免疫原性。 

【文章来源】：河南农业科学. 2020,49(09)北大核心

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

重组质粒pET28a-VP2的BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定

VP2蛋白的可溶性表达结果

AGP效价检测结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白及其疫苗的研究进展[J]. 韩玉婷,何勇,许革学,朱艳平,马秀园,王选年.  河南农业科学. 2016(03)
[2]鸡传染性法氏囊病病毒BC6/85株VP2基因的原核表达、纯化及鉴定[J]. 刘丹,杨承槐,吴华伟,李启红,高金源,陈建,郎洪武.  中国兽药杂志. 2015(05)

硕士论文
[1]传染性法氏囊病强、弱毒衣壳蛋白的可溶性表达、纯化及应用[D]. 高祥.中国农业科学院 2017



本文编号：3133006