表达鸡白细胞介素2的重组马立克病毒的免疫保护效力及免疫增强作用

发布时间：2021-04-13 10:40

　　疫苗的使用在马立克氏病（MD）的预防和控制中起到重要作用。但随着马立克氏病毒（MDV）毒力不断的进化,现有疫苗已不能提供较好的保护。鸡白细胞介素2（ChIL-2）是具有广泛生物活性的细胞因子,作为免疫增强剂在疫苗的研制中得到广泛研究。本研究利用MDV血清Ⅰ型毒株CVI988/Rispens为载体,构建表达ChIL-2基因的重组病毒（rMDV-IL2）,评价其免疫保护效力及免疫增强作用,为MD及其他疾病的防制提供疫苗储备。将ChIL-2基因定向克隆至pEASY-M1表达载体中,通过PCR方法扩增出ChIL-2基因的表达盒,并与实验室先前构建的含有CVI988/Rispens基因组同源臂的pU/D载体相连,构建转移载体pU/IL2/D。将pU/IL2/D与含有GFP报告基因的CVI988/Rispens基因组共转染CEF细胞,通过筛选、纯化获得重组病毒rMDV-IL2。PCR、Western-Blot和MTT试验及复制特性检测结果显示,ChIL-2基因正确插入到MDV基因组中并能成功表达具有生物活性的ChIL-2,且对病毒在体外的复制特性无显著影响。对1日龄雏鸡分别免疫rMDV-IL2和C... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
目录
符号说明
第一章 文献综述
    1 马立克氏病疫苗的研究进展
        1.1 MDV的发现和分型
        1.2 MDV毒力的进化
        1.3 MD疫苗的免疫保护机制
        1.4 MD疫苗
    2 鸡白细胞介素-2（ChIL-2）的研究进展
        2.1 ChIL-2的免疫增强作用
        2.2 ChIL-2的免疫治疗作用
第二章 表达鸡白细胞介素2的重组马立克病毒的免疫保护效力及免疫增强作用
    1 材料
        1.1 质粒、细菌、病毒和细胞
        1.2 鸡胚和实验动物
        1.3 主要试剂
        1.4 主要仪器
    2 方法
        2.1 转移载体的构建
        2.2 重组病毒的构建
        2.3 rMDV-IL2对鸡免疫系统的影响
        2.4 rMDV-IL2的免疫效力试验
        2.5 rMDV-IL2对新城疫La Sota疫苗的免疫增强作用
        2.6 统计分析
    3 结果
        3.1 转移载体的构建
        3.2 重组病毒的挑选与纯化
        3.3 rMDV-IL2的鉴定
+、CD8⁺T淋巴细胞比例的影响">        3.4 rMDV-IL2对鸡外周血中CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞比例的影响
        3.5 rMDV-IL2免疫后对鸡免疫器官指数的影响
        3.6 MDV超强毒株RBIB感染鸡后的病理学观察
        3.7 rMDV-IL2的免疫保护效力
        3.8 rMDV-IL2对新城疫La Sota疫苗免疫后抗体滴度的影响
    4 讨论
全文结论
参考文献
致谢
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【参考文献】：
期刊论文
[1]白细胞介素-2在动物疾病防治中的应用进展[J]. 沙万里,杨桂连,王春凤.  中国兽药杂志. 2013(04)
[2]鸡传染性喉气管炎病毒gD基因与ChIL-2重组禽痘病毒的构建及其免疫效力试验[J]. 杨明凡,张素梅,陈红英,魏战勇,崔保安.  中国兽医学报. 2012(12)
[3]禽IL-2与传染性法氏囊VP2融合蛋白免疫学特性[J]. 王臣,赵战勤,张春杰,刘一尘,丁轲,李银聚,程相朝,陈溥言.  生物工程学报. 2010(04)
[4]重组鸡白细胞介素-2对禽流感灭活疫苗免疫增强作用的研究[J]. 牛泽,任晓峰,曾岩,刘明,卢春颖,李广兴.  中国家禽. 2010(03)
[5]鸡马立克氏病疫苗研究进展及病毒毒力进化态势[J]. 张立杰.  中国家禽. 2009(22)
[6]马立克氏病研究的最新动态——第八届国际马立克氏病研讨会概况[J]. 韦平.  中国家禽. 2008(17)
[7]IBV S1基因和IL-2基因双顺反子DNA疫苗的免疫原性研究[J]. 唐梦君,王红宁,周生,黄勇,柳萍,胡慧琼,廖娟.  微生物学报. 2007(06)
[8]重组鸡IL-2对禽流感灭活苗免疫增强作用试验[J]. 徐前明,李祥瑞.  动物医学进展. 2006(10)
[9]重组鸡IL-2的抗球虫作用[J]. 谢昆,李祥瑞.  中国兽医杂志. 2006(08)
[10]重组鸡痘病毒表达的鸡IL-1β和IL-2以及cMGF对新城疫LaSota疫苗免疫效果的影响[J]. 邵卫星,卢建红,彭大新,刘秀梵.  中国兽医科学. 2006(08)

博士论文
[1]表达MDV gB CTL表位与鸡HSP108融合蛋白基因的重组CVI988病毒的构建及免疫保护试验[D]. 邱亚峰.南京农业大学 2006
[2]表达血清1、3型马立克氏病病毒gB主要抗原表位的重组CVI988病毒构建及其免疫保护作用[D]. 张雪莲.南京农业大学 2003

硕士论文
[1]含有MDVgB和IL-2重组火鸡疱疹病毒的构建及其免疫保护作用[D]. 魏雪涛.南京农业大学 2005



本文编号：3135148