鸡输卵管特异性表达启动子的迷你化研究

发布时间：2021-04-18 03:11

　　用转基因动物生产药用蛋白已取得突破性进展,具有广阔的应用前景。与哺乳动物的乳腺生物反应器相比,家禽输卵管作为生物反应器则具有个体小,产蛋量高,世代间隔小,易于规模化生产,禽蛋中蛋白含量相对较高等优势。但是基于禽类自身的生殖生理特点,鸡输卵管生物反应器的研究相对滞后,外源蛋白在输卵管中缺乏获得特异、高效率的表达调控手段。近几年,转基因家禽的制备在国内外多个研究机构取得了成功,如何使转基因家禽高效率的生产重组蛋白,已成为决定家禽生物反应器能否进入应用领域的关键。本实验拟筛选高效调控卵清蛋白基因表达的元件,并将其整合制备人工优化启动子,将能有效提高卵清蛋白的生产效率。本研究根据实验室已有结果,选取鸡输卵管卵清蛋白基因上游调控序列和第一内含子作为研究对象,对其进行表达载体构建和优化研究。本研究从以下几方面开展：1、鸡卵清蛋白基因上游调控序列表达载体的构建根据实验室已有结果对鸡卵清蛋白基因上游调控序列进行分析得出,-921-+38区域具有较高的表达活性,但失去了组织特异性,上游2.1kb具有较高的转录活性和组织特异性,3.1kb区域则具有更严密的组织特异性,长于3.1kb表达活性显著降低。根据分... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
    1.1 转基因家禽的研究概况
    1.2 目前转基因鸡的制备方法
    1.3 鸡输卵管作为生物反应器的优势
    1.4 卵清蛋白基因结构及其表达调控机理
    1.5 卵清蛋白基因内含子功能的研究
    1.6 本课题研究概况
第二章 第一内含子系列变异报告载体的制备
    2.1 材料和仪器
    2.2 实验方法
    2.3 实验结果
    2.4 测序比对结果
    2.5 讨论
第三章 鸡卵清蛋白基因上游调控序列系列变异荧光素酶报告基因载体构建
    3.1 材料与试剂仪器
    3.2 试验方法
    3.3 实验结果
    3.4 讨论
第四章 几种重组报告基因载体表达活性测定
    4.1 材料与试剂仪器
    4.2 实验方法
    4.3 实验结果
    4.4 讨论
第五章 鸡原代输卵管上皮细胞的培养
    5.1 材料与试剂仪器
    5.2 试验步骤
    5.3 实验结果
    5.4 讨论
第六章 原代输卵管上皮细胞电转染条件的优化
    6.1 材料试剂与仪器
    6.2 试验方法
    6.3 实验结果
    6.4 讨论
全文结论
创新点
后续研究展望
参考文献
致谢



本文编号：3144680