纳米氧化铜和硫酸铜对猪SIEC细胞铜代谢酶影响的比较研究

发布时间：2021-04-18 06:59

　　铜是生物机体生命活动的必需元素,畜牧生产中由于高铜有促生长和抗菌等作用,刺激了养殖户盲目的添加高铜,剂量控制不好就会导致动物机体中毒,同时大量没有被机体吸收的铜排出体外造成环境污染。纳米氧化铜由于尺寸小、活性高、易被动物机体吸收等特点成为一种可行性的铜源。本试验通过SIEC细胞的培养,比较研究纳米氧化铜和硫酸铜对细胞铜相关蛋白表达的影响,对纳米氧化铜的代谢规律及其代替硫酸铜作为猪饲料铜源的可能性进行了探讨。将冻存的SIEC细胞解冻后常规培养,采用第5-8代细胞进行试验。培养的细胞分为正常对照组、硫酸铜组、纳米氧化铜组。硫酸铜组细胞培养液当中分别添加相同体积不同剂量的CuSO4·5H2O使其终浓度分别为5、10、20、40μg/mL CuSO4,纳米氧化铜组细胞培养液当中分别添加相同体积不同剂量的纳米氧化铜使其终浓度分别为5、10、20、40μg/mL。铜处理后细胞贴壁培养24h,采样,ELISA方法测定MT含量,比色法检测细胞CuZn-SOD活性,荧光定量PCR检测MT、CTR1、ATOX1、 CuZn-SOD、COX17基因的表达量。细胞活性的检测在铜处理细胞12h、24h、36h、... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
縮略词表
1 文献综述
    1.1 铜对猪生产的影响
        1.1.1 铜的促生长作用
        1.1.2 铜对免疫功能的影响
        1.1.3 铜对肠道微生物群的影响
        1.1.4 高铜的危害
    1.2 纳米材料及其生物学效应
        1.2.1 纳米技术与纳米材料
        1.2.2 纳米材料的理化性质
        1.2.3 纳米技术的应用
    1.3 铜代谢蛋白ATOX1、CTR1、COX17、CuZn-SOD、MT
        1.3.1 铜转运蛋白（Copper transporter 1,CTR1）
        1.3.2 金属硫蛋白（Metallothionein,MT）
        1.3.3 抗氧化酶（Antioxidant 1,ATOX1）
        1.3.4 细胞色素C氧化酶（Cytochrome C oxidase,CCO）
        1.3.5 超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）
    1.4 研究的目的意义
2 试验研究
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验细胞
        2.1.2 试验试剂
        2.1.3 试验仪器
    2.2 试验方法
        2.2.1 细胞的培养
        2.2.2 试验分组
        2.2.3 MTT法测定细胞生长曲线
        2.2.4 细胞CuZn-SOD活性的测定
        2.2.5 细胞MT含量的测定
        2.2.6 铜转运相关蛋白mRNA含量的测定
    2.3 数据处理
3 结果分析
    3.1 细胞形态观察
    3.2 纳米氧化铜和硫酸铜对细胞增殖的影响
    3.3 纳米氧化铜和硫酸铜对细胞CuZn-SOD活性及MT含量的影响
        3.3.1 纳米氧化铜和硫酸铜对细胞CuZn-SOD活性的影响
        3.3.2 纳米氧化铜和硫酸铜对细胞MT含量的影响
    3.4 纳米氧化铜和硫酸铜对铜转运相关蛋白mRNA的影响
        3.4.1 细胞总RNA提取验证结果
        3.4.2 纳米氧化铜和硫酸铜对SIEC细胞CTR1基因表达的影响
        3.4.3 纳米氧化铜和硫酸铜对SIEC细胞MT基因表达的影响
        3.4.4 纳米氧化铜和硫酸铜对SIEC细胞CuZn-SOD基因表达的影响
        3.4.5 纳米氧化铜和硫酸铜对SIEC细胞COX17基因表达的影响
        3.4.6 纳米氧化铜和硫酸铜对SIEC细胞ATOX1基因表达的影响
4 讨论
    4.1 纳米氧化铜和硫酸铜对细胞增殖的影响
    4.2 纳米氧化铜和硫酸铜对CuZn-SOD活性和MT含量的影响
        4.2.1 纳米氧化铜和硫酸铜对细胞CuZn-SOD活性的影响
        4.2.2 纳米氧化铜和硫酸铜对MT含量的影响
    4.3 纳米氧化铜和硫酸铜对铜代谢蛋白CTR1、MT、CuZu-SOD、COX17、ATOX1基因转录的影响
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]铜、维生素A及互作效应对肉仔鸡肠壁组织结构、肠道微生物和血清生长激素的影响[J]. 张春善,蒋燕侠,王博,王汝都,申红星.  中国农业科学. 2009(04)
[2]人脐血CD133细胞的分离及其体外扩增的研究[J]. 谭玲,陈勇华,张春明,陈伟,沈亚芳,沈鹤柏,董亚明,李兴玉.  现代生物医学进展. 2007(06)
[3]纳米ZnO的应用研究进展[J]. 邵金璐,卢秀萍.  浙江化工. 2005(10)
[4]基于溶胶-凝胶壳聚糖/SiO2杂化材料的安培型葡萄糖生物传感器[J]. 谭学才,翟海云,李荫,邹小勇,蔡沛祥.  高等学校化学学报. 2004(09)
[5]高铜促生长机理综述[J]. 程忠刚,林映才,许梓荣.  兽药与饲料添加剂. 2001(03)
[6]纳米（Nanometer）与纳米养鱼技术[J]. 丁永良.  现代渔业信息. 2001(06)
[7]高铜对早期断奶仔猪消化酶活性、营养物质消化率和肠道微生物的影响[J]. 冷向军,王康宁.  饲料研究. 2001(04)
[8]畜禽日粮中高铜的负面影响及其调整方法[J]. 方立超.  畜牧兽医杂志. 2000(02)
[9]重金属在金属硫蛋白基因表达中的调控作用[J]. 谢红.  国外医学(卫生学分册). 1999(03)
[10]纳米技术与纳米材料[J]. 李钟华,张秀媚,杨亭阁.  化工进展. 1996(02)

博士论文
[1]猪饲料中高剂量的铜锌对环境的影响及其控制[D]. 李松岩.南京农业大学 2005

硕士论文
[1]铜对断奶仔猪采食量的影响及其机理研究[D]. 祝丹.四川农业大学 2009
[2]纳米铜和硫酸铜对断奶仔猪生长、腹泻和消化的影响及作用机理探讨[D]. 王艳华.浙江大学 2002



本文编号：3145038