犬瘟热病毒实时荧光RT-RPA检测方法的建立及应用

发布时间：2021-04-19 07:21

　　为建立犬瘟热病毒（CDV）临床快速检测方法,针对CDV保守N基因依据重组酶聚合酶等温扩增（RPA）引物设计原理进行RPA引物探针设计,通过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验和临床样品检测,建立了CDV实时荧光RT-RPA检测方法。结果显示,反应体系中M-MLV反转录酶最适浓度为4 U/μL,所建CDV实时荧光RT-RPA检测方法特异性较好,敏感性最低可检测到5.68×10² copies/μL,高于国标RT-PCR（GB/T 27532-2011）检测方法。建立的CDV实时荧光RT-RPA检测方法具有较高的敏感性和特异性、操作简便、20 min内判定结果,可用于临床犬瘟热快速诊断,对犬瘟热的防控具有重要意义。 

【文章来源】：动物医学进展. 2020,41(11)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

目标基因扩增结果

为筛选反转录酶最佳反应浓度,选取M-MLV反转录酶终浓度2、4、8 U/μL进行RT-RPA荧光检测。结果显示,反转录酶在4 U/μL浓度下反应起峰时间最短,峰值最高(图2),因此本研究将M-MLV反转录酶最适反应浓度定为4 U/μL。2.3 CDV实时荧光RT-RPA特异性试验

结果显示,经实时荧光RT-RPA检测,CDV核酸样品在反应7 min后出现荧光信号显著增强,其他对照病毒核酸样品均未检测出荧光信号(图3)。国标RT-PCR检测也仅有CDV核酸样品出现特异性扩增,其他对照病毒均无相应条带(图4)。表明所建CDV RT-RPA检测方法特异性较好。图4 CDV RT-PCR特异性试验

【参考文献】：
期刊论文
[1]重组酶聚合酶扩增技术研究进展[J]. 施奕,徐昌平,余蓓蓓,卢亦愚,梅玲玲.  病毒学报. 2020(03)
[2]快速检测犬瘟热病毒的实时荧光RPA方法的建立[J]. 熊炜,王艳,王楷宬,蒋静,黄保续,田桢干,林颖峥,李健.  中国兽医科学. 2019(01)
[3]犬瘟热的研究进展[J]. 朱庆贺,张鹏宇,王爽,陈曦,王观悦,史同瑞.  黑龙江畜牧兽医. 2017(19)



本文编号：3147102