基于单克隆抗体的喹诺酮和磺胺类兽药ELISA研究

发布时间：2021-04-20 20:33

　　本论文制备了两种能识别喹诺酮类和磺胺类兽药的单克隆抗体,并建立了分别检测喹诺酮类和磺胺类药物的酶联免疫法分析方法。采用活化酯法直接将诺氟沙星与载体蛋白BSA偶联,制备人工免疫原并免疫小鼠。将小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,通过筛选获得杂交瘤细胞。应用有限稀释法进行克隆,最终获得一株能稳定分泌识别喹诺酮类药物抗体的细胞株4C6F6D。亚型鉴定为：重链,IgG3,轻链,Kappa。通过优化抗体包被量、酶标抗原的稀释倍数、封闭液、pH等条件,建立了一种直接竞争ELISA法。该方法的灵敏度IC50=0.45±0.07μg/L,检出限IC15=0.09±0.02μg/L。CIP、NAL、ENR、PEF、ENO、OFL、 OXO、FLU、FLE和LOM的1C50值范围为0.27-8.54μ/L,交叉反应率为5.27-166.67%；MAR、SAR、DIF、GAT、PIP和SPA的IC50值范围为14.21-88.13μg/L,交叉反应率为0.51-3.17%。应用活化酯法将两种磺胺类人工半抗原与载体蛋白KLH进行偶联,制备人工免疫原并免疫小鼠。将优选后的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,... 

【文章来源】：天津科技大学天津市

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 兽药残留概述
        1.1.1 动物性食品中兽药残留现状
        1.1.2 兽药残留产生的主要原因
        1.1.3 兽药残留的危害
        1.1.4 兽药残留控制措施
    1.2 喹诺酮类兽药概述
        1.2.1 喹诺酮类药物
        1.2.2 喹诺酮类药物的危害
        1.2.3 喹诺酮类药物残留检测方法研究进展
    1.3 磺胺类药物概述
        1.3.1 磺胺类药物
        1.3.2 磺胺类药物残留的危害
        1.3.3 磺胺类药物残留检测方法研究进展
    1.4 单克隆抗体技术简介
        1.4.1 单克隆抗体
        1.4.2 单克隆抗体的应用
        1.4.3 单克隆抗体制备技术最新进展
    1.5 论文研究的目的及意义
    1.6 论研究的主要内容
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要药品和试剂
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 实验动物
        2.1.4 常用溶液的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 喹诺酮类药物单克隆抗体制备及ELISA法的建立
        2.2.2 磺胺类药物单克隆抗体制备及ELISA法的建立
3 结果与讨论
    3.1 喹诺酮类药物单克隆抗体制备及ELISA法建立
        3.1.1 喹诺酮类药物人工抗原的设计
        3.1.2 小鼠抗血清效价及其特异性的测定
        3.1.3 杂交瘤细胞株的筛选和克隆
        3.1.4 单克隆抗体的亚型鉴定
        3.1.5 单克隆抗体的腹水纯化
        3.1.6 喹诺酮类药物直接竞争ELISA法的建立
        3.1.7 喹诺酮类药物直接竞争ELISA法性能指标的评价
    3.2 磺胺类单克隆抗体的制备与ELISA法的建立
        3.2.1 磺胺免疫原的合成
        3.2.2 磺胺包被原及酶标抗原的合成
        3.2.3 小鼠抗血清效价及其特异性的测定
        3.2.4 杂交瘤细胞株的筛选和克隆
        3.2.5 单克隆抗体的亚型鉴定
        3.2.6 单克隆抗体的腹水纯化
        3.2.7 磺胺类药物间接竞争ELISA法的建立
        3.2.8 磺胺类药物直接竞争ELISA法的建立
        3.2.9 磺胺类药物间接竞争ELISA法性能指标的评价
        3.2.10 磺胺类药物直接竞争ELISA法性能指标的评价
4 结论
5 展望
6 参考文献
7 攻读硕士学位期间发表论文情况
8 致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]诺氟沙星单克隆抗体的制备及初步应用[J]. 李超英,姜金庆.  食品工业科技. 2011(09)
[2]胶体金免疫层析法检测食品中的磺胺类药物残留[J]. 韩静,刘恩梅,王帅,李源珍,王硕.  现代食品科技. 2011(05)
[3]单克隆抗体制备技术及应用的研究进展[J]. 郭粉粉,梁文波,张学梅.  医学综述. 2011(08)
[4]肉类食品中兽药残留的来源、危害及防控措施[J]. 张洁,黄蓉,徐桂花.  肉类工业. 2011(03)
[5]高效液相色谱-串联质谱法同时测定动物源性食品中24种磺胺类药物残留[J]. 刘佳佳,佘永新,刘洪斌,王静,吕晓玲,王淼,史晓梅,徐思远,肖航.  分析试验室. 2011(02)
[6]单克隆抗体制备技术的最新进展及应用前景[J]. 孔君,刘箐,韩跃武,王天昌,刘金芝.  免疫学杂志. 2011(02)
[7]高效液相色谱-串联质谱法快速测定鱼肉中4种氟喹诺酮类药物残留[J]. 黄优生,刘波平,朱筱玲,李桂生.  食品科学. 2010(02)
[8]抗CD25单克隆抗体治疗耐激素的急性移植物抗宿主病疗效分析[J]. 刘静,王恒湘,段连宁,阎洪敏,薛梅,朱玲,丁丽,王志东.  中国实验血液学杂志. 2009(01)
[9]肉类食品中兽药残留快速检测研究进展[J]. 郝贵增,龙淼.  肉类工业. 2008(08)
[10]高效毛细管电泳法同时分离氟喹诺酮类和磺胺类药物的研究[J]. 邵黎,檀华蓉,祁克宗,王艳红,李慧.  中国饲料. 2008(16)

硕士论文
[1]分泌抗恩诺沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立[D]. 龙淼.吉林农业大学 2006



本文编号：3150355