HPS抗体微量板凝集试验方法的建立及分离株灭活疫苗研制
发布时间：2021-04-21 20:17
副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）属于巴斯德菌科（Pasteurellaceae）嗜血杆菌属（Haemophilus）。它是猪上呼吸道依附的共栖菌,在条件发生突变的情况下侵袭猪体,它主要表现为脏器的浆液性纤维素性胸膜炎、脑膜炎、心包炎和关节炎症为特征的全身性细菌疾病。该病发病率和死亡率呈显著上升趋势,已经成为全球养猪产业影响最为严重的细菌性传染病之一,给我国的养猪业也造成惨重的经济损失。本试验主要研究如下：1.在16省、市的发病猪场收集疑似HPS病料样品,共分离出168株HPS分离株,通过菌落和菌体形态、生化鉴定等试验,都符合HPS病原特性,PCR检测验证分离菌株为HPS菌株。表明副猪嗜血杆菌病原在我国猪场中普遍流行存在。2.将HPS分离株经KRG血清分型和ERIC-PCR基因分型两种方法分型,其中KRG血清分型结果4型的36株（21.43%）,5型的31株（18.45%）,13型32株（19.05%）,占总比例的58.93%,占有毒力血清型（强毒和中等毒力血清型）比例76.74%; ERIC-PCR基因分型结果ERIC-PCR指纹图谱与标准菌株血清4型E...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
1.1 副猪嗜血杆菌的病原学
1.2 副猪嗜血杆菌的毒力因子
1.2.1 血清型与毒力关系
1.2.2 主要潜在毒力因子研究
1.3 副猪嗜血杆菌的流行病学
1.3.1 副猪嗜血杆菌的分型方法
1.3.2 流行病学
1.4 副猪嗜血杆菌疫苗研究进展
1.4.1 副猪嗜血杆菌灭活疫苗
1.4.2 活菌疫苗
1.4.3 重组亚单位疫苗
1.4.4 菌影疫苗
1.4.5 其他新型疫苗
1.4.6 疫苗佐剂
1.5 研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 试验菌株来源
2.1.2 主要培养基及其配制
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要仪器
2.1.5 实验动物
2.2 试验方法
2.2.1 副猪嗜血杆菌的分离与鉴定
2.2.2 副猪嗜血杆菌的KRG血清分型与ERIC-PCR基因分型
2.2.3 副猪嗜血杆菌生物学特性研究
2.2.4 副猪嗜血杆菌抗体微量板凝集试验方法的建立
2.2.5 副猪嗜血杆菌血清流行病学监测
2.2.6 副猪嗜血杆菌灭活疫苗的研制
3 试验结果与分析
3.1 副猪嗜血杆菌的分离与鉴定
3.1.1 样品采集
3.1.2 细菌形态
3.1.3 HPS分离菌株生化鉴定结果
3.1.4 HPS分离株PCR鉴定结果
3.1.5 菌株PCR扩增片段测序
3.2 副猪嗜血杆菌的KRG血清分型与ERIC-PCR基因分型
3.2.1 副猪嗜血杆菌的KRG血清分型
3.2.2 副猪嗜血杆菌的ERIC-PCR基因分型
3.3 副猪嗜血杆菌生物学特性研究
3.3.1 副猪嗜血杆菌生长曲线的测定
3.3.2 副猪嗜血杆菌在不同条件下保存时间的测定
600值相关性曲线测定"> 3.3.3 副猪嗜血杆菌活菌数与OD600值相关性曲线测定
50)测定"> 3.3.4 Balb/c小鼠半数致死量(LD50)测定
3.4 副猪嗜血杆菌抗体微量板凝集试验方法的建立
3.4.1 抗原最适工作浓度的测定
3.4.2 特异性试验
3.4.3 重复性试验
3.5 副猪嗜血杆菌血清流行病学监测
3.5.1 我国副猪嗜血杆菌病原学调查
3.5.2 我国副猪嗜血杆菌血清型调查
3.6 副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的研制
3.6.1 疫苗候选菌株的筛选
3.6.2 副猪嗜血杆菌灭活疫苗的实验室制备
3.6.3 副猪嗜血杆菌灭活疫苗的安全性试验
3.6.4 副猪嗜血杆菌不同佐剂灭活疫苗产生抗体效价比较
3.6.5 副猪嗜血杆菌灭活疫苗攻毒保护试验
3.6.6 母源抗体对仔猪的被动保护试验
4 讨论
4.1 副猪嗜血杆菌的分离与鉴定
4.2 副猪嗜血杆菌的KRG血清分型与ERIC指纹图谱
4.3 副猪嗜血杆菌生物学特性研究
4.3.1 副猪嗜血杆菌的生长曲线
4.3.2 副猪嗜血杆菌在不同环境下保存时间
4.3.3 Balb/c小鼠半数致死量
4.4 副猪嗜血杆菌抗体微量板凝集试验方法的建立
4.5 副猪嗜血杆菌血清流行病学监测
4.6 副猪嗜血杆菌灭活疫苗的研制
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]2012年我国部分省市规模化猪场副猪嗜血杆菌分离鉴定及菌株血清分型[J]. 王建,邵卫星,吕占军,王超,董雅琴,刘爽,王博扬,吴发兴,张志,刘自立,王佳,李晓成. 动物医学进展. 2014(03)
[2]副猪嗜血杆菌弱毒疫苗的研制[J]. 苏丹萍,王文豪,章胜,张丹琳,张显浩,陈瑞爱,贺东生. 中国畜牧兽医. 2012(11)
[3]肠出血性大肠埃希菌O157:H7菌影生物学活性的初步研究[J]. 黄春艳,蔡昆,王兴,王博,丁晓,裴秀英. 安徽医科大学学报. 2012(09)
[4]副猪嗜血杆菌血清5型TbpA蛋白的表达及其免疫原性分析[J]. 李建军,胡明明,朱晓凯,李艳玲,张艳禾,谢芳,王春来. 中国预防兽医学报. 2012(03)
[5]副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 王留,王中华. 中国猪业. 2012(01)
[6]畜产品生产过程中兽药残留的危害及其控制措施[J]. 汪慧英. 中国动物检疫. 2011(10)
[7]副猪嗜血杆菌病研究进展[J]. 司振书,王桂英. 中国畜牧兽医. 2011(06)
[8]副猪嗜血杆菌菌影的制备[J]. 胡明明,常月红,张艳禾,司薇,谢芳,于申业,刘慧芳,刘思国,沈楠,王春来. 中国预防兽医学报. 2011(01)
[9]副猪嗜血杆菌灭活疫苗佐剂的筛选[J]. 罗添添,岳华,汤承. 四川畜牧兽医. 2010(11)
[10]副猪嗜血杆菌灭活疫苗对仔猪免疫保护效力的研究[J]. 宋凤香,陆桂英,肖丽辉,肖毅. 中国畜牧兽医文摘. 2010(04)
博士论文
[1]副猪嗜血杆菌的分离鉴定及诊断方法与灭活疫苗的研究[D]. 蔡旭旺.华中农业大学 2006
硕士论文
[1]副猪嗜血杆菌的分离鉴定及蜂胶疫苗的免疫保护效力研究[D]. 钟霏.四川农业大学 2012
[2]副猪嗜血杆菌菌影（Ghost）的制备及其免疫效力评价[D]. 胡明明.中国农业科学院 2011
本文编号：3152422
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
1.1 副猪嗜血杆菌的病原学
1.2 副猪嗜血杆菌的毒力因子
1.2.1 血清型与毒力关系
1.2.2 主要潜在毒力因子研究
1.3 副猪嗜血杆菌的流行病学
1.3.1 副猪嗜血杆菌的分型方法
1.3.2 流行病学
1.4 副猪嗜血杆菌疫苗研究进展
1.4.1 副猪嗜血杆菌灭活疫苗
1.4.2 活菌疫苗
1.4.3 重组亚单位疫苗
1.4.4 菌影疫苗
1.4.5 其他新型疫苗
1.4.6 疫苗佐剂
1.5 研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 试验菌株来源
2.1.2 主要培养基及其配制
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要仪器
2.1.5 实验动物
2.2 试验方法
2.2.1 副猪嗜血杆菌的分离与鉴定
2.2.2 副猪嗜血杆菌的KRG血清分型与ERIC-PCR基因分型
2.2.3 副猪嗜血杆菌生物学特性研究
2.2.4 副猪嗜血杆菌抗体微量板凝集试验方法的建立
2.2.5 副猪嗜血杆菌血清流行病学监测
2.2.6 副猪嗜血杆菌灭活疫苗的研制
3 试验结果与分析
3.1 副猪嗜血杆菌的分离与鉴定
3.1.1 样品采集
3.1.2 细菌形态
3.1.3 HPS分离菌株生化鉴定结果
3.1.4 HPS分离株PCR鉴定结果
3.1.5 菌株PCR扩增片段测序
3.2 副猪嗜血杆菌的KRG血清分型与ERIC-PCR基因分型
3.2.1 副猪嗜血杆菌的KRG血清分型
3.2.2 副猪嗜血杆菌的ERIC-PCR基因分型
3.3 副猪嗜血杆菌生物学特性研究
3.3.1 副猪嗜血杆菌生长曲线的测定
3.3.2 副猪嗜血杆菌在不同条件下保存时间的测定
600值相关性曲线测定"> 3.3.3 副猪嗜血杆菌活菌数与OD600值相关性曲线测定
50)测定"> 3.3.4 Balb/c小鼠半数致死量(LD50)测定
3.4 副猪嗜血杆菌抗体微量板凝集试验方法的建立
3.4.1 抗原最适工作浓度的测定
3.4.2 特异性试验
3.4.3 重复性试验
3.5 副猪嗜血杆菌血清流行病学监测
3.5.1 我国副猪嗜血杆菌病原学调查
3.5.2 我国副猪嗜血杆菌血清型调查
3.6 副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的研制
3.6.1 疫苗候选菌株的筛选
3.6.2 副猪嗜血杆菌灭活疫苗的实验室制备
3.6.3 副猪嗜血杆菌灭活疫苗的安全性试验
3.6.4 副猪嗜血杆菌不同佐剂灭活疫苗产生抗体效价比较
3.6.5 副猪嗜血杆菌灭活疫苗攻毒保护试验
3.6.6 母源抗体对仔猪的被动保护试验
4 讨论
4.1 副猪嗜血杆菌的分离与鉴定
4.2 副猪嗜血杆菌的KRG血清分型与ERIC指纹图谱
4.3 副猪嗜血杆菌生物学特性研究
4.3.1 副猪嗜血杆菌的生长曲线
4.3.2 副猪嗜血杆菌在不同环境下保存时间
4.3.3 Balb/c小鼠半数致死量
4.4 副猪嗜血杆菌抗体微量板凝集试验方法的建立
4.5 副猪嗜血杆菌血清流行病学监测
4.6 副猪嗜血杆菌灭活疫苗的研制
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]2012年我国部分省市规模化猪场副猪嗜血杆菌分离鉴定及菌株血清分型[J]. 王建,邵卫星,吕占军,王超,董雅琴,刘爽,王博扬,吴发兴,张志,刘自立,王佳,李晓成. 动物医学进展. 2014(03)
[2]副猪嗜血杆菌弱毒疫苗的研制[J]. 苏丹萍,王文豪,章胜,张丹琳,张显浩,陈瑞爱,贺东生. 中国畜牧兽医. 2012(11)
[3]肠出血性大肠埃希菌O157:H7菌影生物学活性的初步研究[J]. 黄春艳,蔡昆,王兴,王博,丁晓,裴秀英. 安徽医科大学学报. 2012(09)
[4]副猪嗜血杆菌血清5型TbpA蛋白的表达及其免疫原性分析[J]. 李建军,胡明明,朱晓凯,李艳玲,张艳禾,谢芳,王春来. 中国预防兽医学报. 2012(03)
[5]副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 王留,王中华. 中国猪业. 2012(01)
[6]畜产品生产过程中兽药残留的危害及其控制措施[J]. 汪慧英. 中国动物检疫. 2011(10)
[7]副猪嗜血杆菌病研究进展[J]. 司振书,王桂英. 中国畜牧兽医. 2011(06)
[8]副猪嗜血杆菌菌影的制备[J]. 胡明明,常月红,张艳禾,司薇,谢芳,于申业,刘慧芳,刘思国,沈楠,王春来. 中国预防兽医学报. 2011(01)
[9]副猪嗜血杆菌灭活疫苗佐剂的筛选[J]. 罗添添,岳华,汤承. 四川畜牧兽医. 2010(11)
[10]副猪嗜血杆菌灭活疫苗对仔猪免疫保护效力的研究[J]. 宋凤香,陆桂英,肖丽辉,肖毅. 中国畜牧兽医文摘. 2010(04)
博士论文
[1]副猪嗜血杆菌的分离鉴定及诊断方法与灭活疫苗的研究[D]. 蔡旭旺.华中农业大学 2006
硕士论文
[1]副猪嗜血杆菌的分离鉴定及蜂胶疫苗的免疫保护效力研究[D]. 钟霏.四川农业大学 2012
[2]副猪嗜血杆菌菌影（Ghost）的制备及其免疫效力评价[D]. 胡明明.中国农业科学院 2011
本文编号：3152422
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