牛流行热病毒荧光定量PCR检测方法的建立

发布时间：2021-04-27 09:25

　　鉴于牛流行热（BovineEphemeralFever,BEF）对养牛行业的危害以及荧光定量PCR技术高效、快速、精准的优点,本研究针对牛流行热病毒（Bovine Ephemeral Fever Virus,BEFV）G基因建立荧光定量PCR检测方法。并用所建立的荧光定量PCR检测方法对临床采集的样本进行检测。结果显示:在GenBank数据库中对BEFV全基因组序列进行比对分析,找出保守序列,设计1对扩增BEFV G基因片段的引物,通过分子克隆构建重组质粒制备标准曲线,扩增效率是95.1%,用所建立的方法检测临床样本,阳性15份,阳性率为75%。该试验成功建立了检测BEFV的荧光定量PCR检测方法,证明云南省的牛场中广泛存在BEFV,建立的荧光定量PCR检测方法对BEFV的临床诊断和流行病学调查等具有应用价值。 

【文章来源】：国外畜牧学(猪与禽). 2020,40(11)

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 样本采集
        1.1.2 主要仪器
        1.1.3 主要试剂
        1.1.4 引物设计
    1.2 方法
        1.2.1 BEFV RNA的提取
        1.2.2 反转录及荧光定量PCR
        1.2.3 荧光定量PCR标准曲线的建立
        1.2.4 临床样本的检测
2 结果与分析
    2.1 目的片段的扩增鉴定
    2.2 构建BEFV荧光定量PCR的标准曲线
    2.3 临床样本检测
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]牛流行热免疫学浅析[J]. 朱庆虎,陈弘,刘兰刚,秦红丽,康二勇.  畜牧兽医科技信息. 2011(01)
[2]牛流行热研究进展[J]. 刘雨田,孙军峰,郭安玉.  中国动物检疫. 2010(06)
[3]牛流行热病毒人工感染牛外周血淋巴细胞T淋巴细胞亚类的分布研究[J]. 金红,李媛,宋晓华,孟庆文,吴东来,于康震,刘宝全.  中国预防兽医学报. 2002(05)
[4]牛流行热病毒JB76H株G蛋白基因核苷酸序列分析[J]. 金红,李媛,于康震,严隽端,刘宝全.  中国预防兽医学报. 2000(01)
[5]弹状病毒研究的新进展 Ⅱ.病毒的结构蛋白、转录、复制和核衣壳化的研究[J]. 沈加丽,龚祖埙.  中国病毒学. 1998(04)
[6]应用电镜技术对牛流行热病毒形态学的研究[J]. 李成,谷守林,姜绍德,郝桂玉,张坦.  电子显微学报. 1993(01)

博士论文
[1]牛流行热病毒外膜糖蛋白G基因在重组病毒中的表达研究[D]. 金红.东北农业大学 2000

硕士论文
[1]牛流行热病例的综合诊断[D]. 岳瑞超.山东农业大学 2014



本文编号：3163214