p53对TGEV诱生IFN-β的调控作用及其分子机制研究

发布时间：2021-04-29 16:36

　　猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV）能引起猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis of swine,TGE）,主要以腹泻、呕吐和严重脱水等为典型的临床症状,且容易同其他病原发生合并感染,对养猪业的健康发展构成巨大威胁。TGEV在体外感染宿主细胞不仅能引起细胞发生典型的病变效应（cytopathic effect,CPE）,还能诱导细胞产生I型干扰素。对于致细胞CPE的分子机制和诱导干扰素产生的机制,前人已经做过一些探究。肿瘤抑制因子（tumor suppressor）p53从被发现以来就一直是人们研究的热点。对于其在抗肿瘤、应激、细胞周期调控、病毒感染及天然免疫方面的研究已经非常深入。已知多种病毒感染都能激活p53,且能诱导细胞凋亡,以发挥机体的先天防御作用。p53的磷酸化也可以引起干扰素激活通路的活化,进而诱导干扰素的产生。TGEV感染猪肾细胞（PK-15）后可引起p53显著上调而诱导细胞凋亡。那么p53在TGEV早期感染进程中对干扰素的产生发挥了怎样的作用?是何种... 

【文章来源】：海南师范大学海南省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
第一章 文献综述
    1.1 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)
    1.2 p53 研究进展
    1.3 p53 与干扰素(interferon,IFN)诱导通路
    1.4 Toll样受体通路
    1.5 RIG-I样受体通路
    1.6 IFN-β及其调控
第二章 p53 的敲除鉴定对TGEV诱生IFN-β的影响
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要设备
    2.2 方法
        2.2.1 细胞的复苏
        2.2.2 p53 敲除及阳性稳定细胞株的筛选
        2.2.3 基因测序和Western Blot方法鉴定
        2.2.4 细胞培养
        2.2.5 TGEV的增殖
        2.2.6 细胞计数
        2.2.7 TGEV TCID50 的测定
        2.2.8 病毒接种和样品收集
        2.2.9 细胞培养上清中IFN-β浓度测定
        2.2.10 总RNA提取和反转录
        2.2.11 荧光定量PCR测定IFN-β表达量
    2.3 结果
        2.3.1 p53 的测序鉴定
        2.3.2 p53的Western Blot方法鉴定
        2.3.3 病毒的TCID50
        2.3.4 IFN-β的基因定量
        2.3.5 上清培养液IFN-β测定
    2.4 讨论
第三章 p53对TGEV诱生IFN-β的RIG-I受体通路和TLR受体通路的调控作用研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 病毒与细胞
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要设备
    3.2 方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 时间梯度感染样品处理
        3.2.3 RLR通路抑制剂(BX795)处理
        3.2.4 TLR通路抑制剂(resveratrol,白藜芦醇)处理
        3.2.5 总RNA提取和反转录
        3.2.6 荧光定量PCR
    3.3 结果
        3.3.1 p53在TGEV感染过程中上调TLR通路中TRIF,TRAM表达
        3.3.2 p53在TGEV感染过程中上调RLR通路的RIG-I/MDA-5/IPS-1 表达
    3.4 讨论
第四章 p53对IFN-β信号通路及病毒复制的影响
    4.1 实验材料
        4.1.1 病毒与细胞
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 主要设备
    4.2 方法
        4.2.1 细胞培养
        4.2.2 时间梯度感染样品处理
        4.2.3 干扰素诱导剂poly(I:C)处理
        4.2.4 外源IFN-β处理
        4.2.5 总RNA提取和反转录
        4.2.6 荧光定量PCR
    4.3 结果
        4.3.1 p53对TGEV感染后干扰素诱导基因表达的影响
        4.3.2 p53 在低病毒载量感染时对TGEV复制的影响
        4.3.3 p53-/-PK-15 细胞中poly(I:C)刺激的抗病毒作用
    4.4 讨论
参考文献
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
附件


【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡p53抑制传染性法氏囊病病毒复制及gga-miR-2127对其调控的分子机制[J]. 欧阳伟,王永山,孟凯,潘群兴,王晓丽,夏兴霞,诸玉梅,毕振威,董晨红,张海彬.  中国预防兽医学报. 2016(10)
[2]猪传染性胃肠炎病毒非结构蛋白3a和3b融合表达及对细胞周期的影响[J]. 梁亚冰,张琪,常嵘,童德文,许信刚.  中国农业科学. 2015(02)
[3]试论猪传染性胃肠炎[J]. 彭旺兴.  现代农业科学. 2009(04)
[4]干扰素α对丙型肝炎病毒复制子的抑制作用[J]. 贾因棠,魏来,蒋栋,丛旭,费然.  中华医学杂志. 2005(29)
[5]猪传染性胃肠炎病毒河北分离株核衣壳N蛋白基因的克隆与序列分析[J]. 张莉,翁崇鹏,毛娅卿,傅光华,张培君.  中国兽药杂志. 2005(06)
[6]猪传染性胃肠炎病毒核衣壳N蛋白基因的克隆与鉴定[J]. 唐丽杰,师东方,李一经,王荣军.  中国兽医科技. 2002(01)

博士论文
[1]p53在I型干扰素介导的先天性抗甲型流感病毒中的作用研究[D]. 朱紫祥.中国农业科学院 2013
[2]猪流感病毒感染细胞内p53活性变化机制解析[D]. 王晓杜.中国农业科学院 2010

硕士论文
[1]重组融合蛋白TAT-p53对乙型肝炎病毒（HBV）的抑制作用研究[D]. 初骁宇.安徽大学 2015



本文编号：3167809