梅花鹿S100A16基因cDNA克隆及功能初探

发布时间：2021-04-30 02:51

　　恶性肿瘤发病率正逐年增加,已成为目前人类的首要致死原因,肿瘤的治疗愈加受到关注。S100A16基因为S100基因家族的特殊成员,与恶性肿瘤密切相关。早期研究表明该基因在肿瘤细胞中过表达,但后期研究发现其在不同肿瘤细胞中发挥不同作用,预示着S100A16基因在肿瘤中有特殊表达机制与功能作用。生长期梅花鹿鹿茸因其快速生长速度而成为恶性肿瘤研究的重要模型。该基因在鹿科动物基因的研究中鲜见报道,因此对梅花鹿S100A16基因研究具有重要意义。本研究根据GenBank数据库中牛、绵羊S100A16基因序列设计引物,以梅花鹿鹿茸顶端组织cDNA为模板,采用RT-PCR技术和分子克隆技术获得S100A16基因的cDNA序列;通过Q-PCR技术对梅花鹿鹿茸生长前、中和后期间充质组织中S100A16基因表达量的差异进行分析;构建pEGFP-C1-S100A16真核表达载体并转染293T细胞,通过Q-PCR技术分析过表达的S100A16基因对293T细胞中NOTCH1、ZEB1、ZEB2、NANOG、CDKN1A、PSMD9和TP53基因表达量的影响。研究结果表明:（1）梅花鹿S100A16基因CDS区全... 

【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 梅花鹿功能基因的研究概况
        1.1.1 功能基因的早期研究概况
        1.1.2 骨化相关基因的研究概况
        1.1.3 肿瘤相关基因的研究概况
        1.1.4 再生相关基因的研究概况
        1.1.5 转录组的研究概况
    1.2 S100A16基因的研究现状
        1.2.1 S100基因家族概述
        1.2.2 S100A16基因及其蛋白结构特性的研究
        1.2.3 S100A16基因与肿瘤相关性的研究
        1.2.4 S100A16基因与肥胖相关性的研究
    1.3 目的意义
2 材料方法
    2.1 样品采集
    2.2 RNA的提取、纯化及反转录
    2.3 S100A16基因的T-A克隆
    2.4 S100A16蛋白的生物信息分析
    2.5 S100A16蛋白进化树的构建
    2.6 S100A16基因的Q-PCR分析
    2.7 pEGFP-C1-S100A16载体的构建
        2.7.1 酶切位点的加入及T-A克隆
        2.7.2 克隆载体的扩增及提取
        2.7.3 真核载体的构建、提取及鉴定
    2.8 细胞培养
        2.8.1 细胞复苏
        2.8.2 细胞换液
        2.8.3 细胞传代
    2.9 真核载体转染293T细胞
    2.10 转染方法的优化
    2.11 细胞RNA的提取及反转录
    2.12 293T细胞中基因表达水平研究
3 结果
    3.1 S100A16基因的T-A克隆
    3.2 S100A16蛋白的生物信息分析
        3.2.1 蛋白的基本理化性质
        3.2.2 蛋白的磷酸化位点及跨膜结构
        3.2.3 蛋白的信号肽区域及亚细胞定位
        3.2.4 蛋白的功能结构域
        3.2.5 蛋白的二级结构
        3.2.6 蛋白的三级结构
    3.3 S100A16蛋白进化树的构建结果
    3.4 S100A16基因的Q-PCR分析结果
    3.5 真核载体构建结果
    3.6 荧光观察结果
    3.7 293T细胞中基因表达水平研究的结果
        3.7.1 S100A16基因表达水平研究的结果
        3.7.2 互作基因表达水平研究的结果
4 讨论
    4.1 S100A16基因克隆及生物信息分析
    4.2 S100A16蛋白氨基酸序列同源性分析
    4.3 S100A16基因的Q-PCR结果分析
    4.4 真核载体构建结果分析
    4.5 真核载体转染结果分析
    4.6 293T细胞中基因表达差异的分析
        4.6.1 NOTCH1、ZEB1和ZEB2基因表达差异的分析
        4.6.2 NANOG和TP53基因表达差异的分析
        4.6.3 CDKN1A和PSMD9基因表达差异的分析
结论
参考文献
附录
攻读学位期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3168694