US7/US8/UL23/US3四基因缺失重组伪狂犬病毒的构建及对犬的致病性评价

发布时间：2021-04-30 23:14

　　伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）感染引起的一种烈性传染病,猪被认为是PRV的自然宿主和主要传染源,免疫接种弱毒疫苗是防控PR的有效途径之一。二基因缺失（US7/US8缺失）和三基因缺失（US7/US8/UL23）的PRV弱毒疫苗广泛应用于猪伪狂犬病防控,取得了较好的免疫效果。近年来,在我国山东、河北、辽宁和北京等地相继报道犬、水貂等毛皮动物通过接触接种弱毒疫苗猪的生肉或内脏而导致感染PRV,表现为搔痒、发热、呼吸系统障碍和消化系统功能紊乱。犬接种上述弱毒疫苗后发现,弱毒疫苗毒株可在犬群中水平传播且对犬致病。虽然伪狂犬缺失疫苗对猪是安全的,但免疫接种后,在猪群中未被完全清除,而犬等毛皮动物通过接触免疫猪的生肉或内脏而感染发病,对犬等毛皮动物仍然具有高致病性。目前广泛使用的伪狂犬疫苗对犬存在安全问题,亟待进一步改进,降低其毒力。US3基因为疱疹病毒的另一重要的毒力基因,对调控细胞凋亡和和调节宿主免疫反应等也起到关键的作用。本研究应用CRISPR/Cas9技术以r PRV^{del US7/US8/UL23}

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 绪论
    1.1 伪狂犬病
        1.1.1 伪狂犬病病毒
        1.1.2 病毒分子生物学特征
        1.1.3 病原学
        1.1.4 临床症状
        1.1.5 流行病学
        1.1.6 疫苗研究进展
    1.2 CRISPR/Cas9 基因编辑技术
        1.2.1 CRISPR/Cas9 简介
        1.2.2 CRISPR/Cas9 工作原理
        1.2.3 CRISPR/Cas9 技术应用
    1.3 研究目的与意义
第二章 US7/US8/UL23/US3 四基因缺失重组伪狂犬病毒的构建
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 毒株、细胞和质粒
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 US3基因的PCR扩增
        2.2.2 US3基因原核表达载体的构建
        2.2.3 US3蛋白的诱导表达
        2.2.4 US3蛋白多克隆抗体的制备
        2.2.5 引物合成及sgRNA的设计
        2.2.6 sgRNA质粒的构建
        2.2.7 rPRVdel US7/US8/UL23 病毒基因组的提取
        2.2.8 sg RNA质粒与rPRVdel US7/US8/UL23 病毒基因组共转染
    2.3 实验结果
        2.3.1 US3基因的PCR扩增
        2.3.2 US3基因原核表达载体的构建
        2.3.3 US3蛋白的诱导表达
        2.3.4 US3蛋白多克隆抗体的鉴定
        2.3.5 引物合成及sgRNA的设计
        2.3.6 sgRNA质粒的构建
        2.3.7 rPRVdel US7/US8/UL23 病毒基因组的PCR鉴定
        2.3.8 US7/US8/UL23/US3 四基因缺失重组伪狂犬病毒的鉴定
    2.4 讨论
第三章 RPRVDELUS7/US8/UL23/US3 生物学特性及致病性分析
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 rPRVdel US7/US8/UL23/US3 遗传稳定性
        3.2.2 rPRVdel US7/US8/UL23/US3 生长动力学
        3.2.3 rPRVdel US7/US8/UL23/US3 致病性分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 rPRVdel US7/US8/UL23/US3 遗传稳定性
        3.3.2 rPRVdel US7/US8/UL23/US3 生长动力学
        3.3.3 rPRVdel US7/US8/UL23/US3 致病性分析
    3.4 讨论
全文结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3169667