犬疱疹病毒的分离鉴定及US6基因的生物信息学分析
发布时间：2021-05-06 15:40
犬疱疹病毒（Canine herpesvirus,CHV）感染仅存在于犬中,是新生幼犬的急性、非发热型致死性疾病。由US6基因编码的gD糖蛋白是疱疹病毒囊膜上的重要组成部分,它具有识别各自红细胞的能力,使各个疱疹病毒都有自己的特征。因此,本研究根据自然发病犬的临床症状、聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）、病毒的分离和纯化、动物回归实验和基因生物信息学分析的实验手段证实了该疾病为CHV感染所致,另外,对US6基因编码的gD糖蛋白的主要抗原区域进行分析并构建了表达载体。试验结果如下:1.从病犬肝脏中提取的DNA经PCR扩增,检测出大小为357 bp的目的条带,经NCBI的Blast比对验证该病毒为CHV,毒株命名为CHV-JX株,并测得该病毒的TCID50为10-4.39/0.1mL;该病毒感染的犬肾细胞（Madin-Darby canine kidney,MDCK）在电镜下可看到圆形的病毒粒子,细胞出现了空泡化;在显微镜下,可以看到24h内细胞开始出现圆缩、变暗,逐渐向周围扩散,最后细胞脱落。将CHV-J...
【文章来源】：江西农业大学江西省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩写词表
第一章 文献综述
1.1 疱疹病毒
1.1.1 疱疹病毒的形态特征
1.1.2 疱疹病毒基因编码的蛋白
1.1.3 疱疹病毒的复制
1.2 犬疱疹病毒概述
1.2.1 病原学
1.2.2 流行病学
1.2.3 临床症状
1.2.4 病理学特征
1.2.5 诊断方法
1.2.6 治控方案
1.3 研究的目的及意义
第二章 犬疱疹病毒的分离鉴定
2 实验方法
2.1 实验材料
2.1.1 样本来源
2.1.2 细胞
2.1.3 质粒及菌株
2.1.4 引物
2.1.5 试剂与耗材
2.1.6 仪器设备
2.2 犬疱疹病毒的分离鉴定
2.2.1 病毒的分离培养
2.2.2 细胞的复苏
2.2.3 MDCK传代细胞培养法
2.2.4 细胞的冻存
2.2.5 细胞攻毒及病毒的繁殖
2.2.6 MDCK细胞半数感染量(TCID50)的测定
2.2.7 病毒的鉴定
2.3 幼犬回归试验
2.4 犬疱疹病毒对MDCK细胞的影响
3 实验结果
3.1 PCR检测结果
3.2 犬肾细胞半数感染量(TCID50)结果
3.3 感染细胞电镜结果
3.4 细胞病变结果
3.5 幼犬回归试验结果
3.6 CHV对MDCK细胞的影响
3.6.1 CHV对MDCK细胞凋亡的影响
3.6.2 CHV对MDCK细胞线粒体膜电位的影响
3.6.3 CHV对MDCK细胞ROS的影响
3.6.4 CHV对MDCK细胞p H值的影响
4 讨论
4.1 犬疱疹病毒的流行病学特点
4.2 疱疹病毒对MDCK细胞的损伤
第三章 犬疱疹病毒US6基因的生物信息学分析
3.
3.1 试剂准备
3.2 US6全基因扩增
3.3 PCR产物的胶回收纯化
3.4 构建重组质粒
3.4.1 连接
3.4.2 转化
3.4.3 提取重组质粒
3.5 犬疱疹病毒US6基因的序列分析
3.6 US6基因的核苷酸序列的同源性分析
3.7 US6基因推导的氨基酸序列分析
3.8 gD蛋白的结构预测
3.9 gD蛋白的抗原性分析
3.10 犬疱疹病毒gD蛋白主要抗原区域的原核表达载体的制备
4 实验结果
4.1 US6全基因凝胶电泳结果
4.2 gD蛋白保守区域分析结果
4.3 US6基因遗传进化树和同源性分析结果
4.4 US6基因的核苷酸序列校对后ORF预测结果
4.5 gD蛋白氨基酸序列的信号肽预测
4.6 gD蛋白氨基酸序列的跨膜区域预测
4.7 gD蛋白氨基酸序列的N糖基化位点预测
4.8 gD蛋白氨基酸序列抗原性分析
4.9 犬疱疹病毒主要抗原区域的表达
4.9.1 犬疱疹病毒CHV-JX株US6基因主要抗原区域的全基因合成
4.9.2 主要抗原区域的全基因合成及表达载体的构建与鉴定
5 讨论
第四章 结论
参考文献
文章的创新与不足
攻读硕士期间发表的学术论文
致谢
附录
【参考文献】：
期刊论文
[1]α疱疹病毒潜伏感染研究进展[J]. 向广韬,吴红霞,仇华吉,孙元. 中国预防兽医学报. 2018(10)
[2]镉通过引发氧化应激和线粒体损伤诱导PK-15细胞凋亡[J]. 董峰,杨佳,李向阳,吴琼,张少英,王兰. 中国生物化学与分子生物学报. 2018(11)
[3]BRD7对过氧化氢处理的心肌细胞线粒体膜电位和胞浆中Cyt C蛋白水平影响研究[J]. 李春晓,李艳,张静静,张勇涛,杨杰书. 中国循证心血管医学杂志. 2018(10)
[4]鱼类病毒诱导细胞凋亡机制研究进展[J]. 周广舟,孙彦鹤,郭爽爽. 动物医学进展. 2018(09)
[5]pH值对人退变椎间盘髓核细胞凋亡的影响[J]. 杨召,苑珍珍,张杨,郭悦,马剑雄,马信龙. 中国矫形外科杂志. 2018(01)
[6]猫疱疹病毒1型部分糖蛋白的研究进展[J]. 张继一,王竹,刘宝山. 养殖技术顾问. 2013(05)
[7]猫疱疹病毒Ⅰ型的分离与鉴定[J]. 张硕,李纯玲,汪葆玥,刘金华,田克恭. 实验动物科学. 2010(02)
[8]蛋白质糖基化修饰研究进展[J]. 李军,杜鑫,Hosseini Moghaddam S.H.,陈玉银. 科技通报. 2009(06)
[9]疱疹病毒gC基因及其编码蛋白研究进展[J]. 练蓓,程安春,汪铭书. 中国动物传染病学报. 2009(02)
[10]单纯疱疹病毒的复制组装机制[J]. 黎庶,胡福泉. 微生物学免疫学进展. 2009(01)
硕士论文
[1]新疆伊犁地区马疱疹病毒1型的分离鉴定及其gB和gD基因的序列分析[D]. 杨永龙.新疆农业大学 2016
[2]疱疹病毒通过抑制组蛋白H1.2的表达来阻止宿主细胞的凋亡[D]. 高海霞.安徽大学 2014
[3]鸡传染性喉气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立和亚单位疫苗研制[D]. 郭建友.扬州大学 2014
[4]基于主成分分析和神经网络的蛋白质糖基化位点的预测[D]. 何伟.中南林业科技大学 2010
[5]伪狂犬病毒Ea株主要衣壳蛋白之间的相互作用研究[D]. 薛念波.华中农业大学 2008
本文编号：3172183
【文章来源】：江西农业大学江西省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩写词表
第一章 文献综述
1.1 疱疹病毒
1.1.1 疱疹病毒的形态特征
1.1.2 疱疹病毒基因编码的蛋白
1.1.3 疱疹病毒的复制
1.2 犬疱疹病毒概述
1.2.1 病原学
1.2.2 流行病学
1.2.3 临床症状
1.2.4 病理学特征
1.2.5 诊断方法
1.2.6 治控方案
1.3 研究的目的及意义
第二章 犬疱疹病毒的分离鉴定
2 实验方法
2.1 实验材料
2.1.1 样本来源
2.1.2 细胞
2.1.3 质粒及菌株
2.1.4 引物
2.1.5 试剂与耗材
2.1.6 仪器设备
2.2 犬疱疹病毒的分离鉴定
2.2.1 病毒的分离培养
2.2.2 细胞的复苏
2.2.3 MDCK传代细胞培养法
2.2.4 细胞的冻存
2.2.5 细胞攻毒及病毒的繁殖
2.2.6 MDCK细胞半数感染量(TCID50)的测定
2.2.7 病毒的鉴定
2.3 幼犬回归试验
2.4 犬疱疹病毒对MDCK细胞的影响
3 实验结果
3.1 PCR检测结果
3.2 犬肾细胞半数感染量(TCID50)结果
3.3 感染细胞电镜结果
3.4 细胞病变结果
3.5 幼犬回归试验结果
3.6 CHV对MDCK细胞的影响
3.6.1 CHV对MDCK细胞凋亡的影响
3.6.2 CHV对MDCK细胞线粒体膜电位的影响
3.6.3 CHV对MDCK细胞ROS的影响
3.6.4 CHV对MDCK细胞p H值的影响
4 讨论
4.1 犬疱疹病毒的流行病学特点
4.2 疱疹病毒对MDCK细胞的损伤
第三章 犬疱疹病毒US6基因的生物信息学分析
3.
3.1 试剂准备
3.2 US6全基因扩增
3.3 PCR产物的胶回收纯化
3.4 构建重组质粒
3.4.1 连接
3.4.2 转化
3.4.3 提取重组质粒
3.5 犬疱疹病毒US6基因的序列分析
3.6 US6基因的核苷酸序列的同源性分析
3.7 US6基因推导的氨基酸序列分析
3.8 gD蛋白的结构预测
3.9 gD蛋白的抗原性分析
3.10 犬疱疹病毒gD蛋白主要抗原区域的原核表达载体的制备
4 实验结果
4.1 US6全基因凝胶电泳结果
4.2 gD蛋白保守区域分析结果
4.3 US6基因遗传进化树和同源性分析结果
4.4 US6基因的核苷酸序列校对后ORF预测结果
4.5 gD蛋白氨基酸序列的信号肽预测
4.6 gD蛋白氨基酸序列的跨膜区域预测
4.7 gD蛋白氨基酸序列的N糖基化位点预测
4.8 gD蛋白氨基酸序列抗原性分析
4.9 犬疱疹病毒主要抗原区域的表达
4.9.1 犬疱疹病毒CHV-JX株US6基因主要抗原区域的全基因合成
4.9.2 主要抗原区域的全基因合成及表达载体的构建与鉴定
5 讨论
第四章 结论
参考文献
文章的创新与不足
攻读硕士期间发表的学术论文
致谢
附录
【参考文献】：
期刊论文
[1]α疱疹病毒潜伏感染研究进展[J]. 向广韬,吴红霞,仇华吉,孙元. 中国预防兽医学报. 2018(10)
[2]镉通过引发氧化应激和线粒体损伤诱导PK-15细胞凋亡[J]. 董峰,杨佳,李向阳,吴琼,张少英,王兰. 中国生物化学与分子生物学报. 2018(11)
[3]BRD7对过氧化氢处理的心肌细胞线粒体膜电位和胞浆中Cyt C蛋白水平影响研究[J]. 李春晓,李艳,张静静,张勇涛,杨杰书. 中国循证心血管医学杂志. 2018(10)
[4]鱼类病毒诱导细胞凋亡机制研究进展[J]. 周广舟,孙彦鹤,郭爽爽. 动物医学进展. 2018(09)
[5]pH值对人退变椎间盘髓核细胞凋亡的影响[J]. 杨召,苑珍珍,张杨,郭悦,马剑雄,马信龙. 中国矫形外科杂志. 2018(01)
[6]猫疱疹病毒1型部分糖蛋白的研究进展[J]. 张继一,王竹,刘宝山. 养殖技术顾问. 2013(05)
[7]猫疱疹病毒Ⅰ型的分离与鉴定[J]. 张硕,李纯玲,汪葆玥,刘金华,田克恭. 实验动物科学. 2010(02)
[8]蛋白质糖基化修饰研究进展[J]. 李军,杜鑫,Hosseini Moghaddam S.H.,陈玉银. 科技通报. 2009(06)
[9]疱疹病毒gC基因及其编码蛋白研究进展[J]. 练蓓,程安春,汪铭书. 中国动物传染病学报. 2009(02)
[10]单纯疱疹病毒的复制组装机制[J]. 黎庶,胡福泉. 微生物学免疫学进展. 2009(01)
硕士论文
[1]新疆伊犁地区马疱疹病毒1型的分离鉴定及其gB和gD基因的序列分析[D]. 杨永龙.新疆农业大学 2016
[2]疱疹病毒通过抑制组蛋白H1.2的表达来阻止宿主细胞的凋亡[D]. 高海霞.安徽大学 2014
[3]鸡传染性喉气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立和亚单位疫苗研制[D]. 郭建友.扬州大学 2014
[4]基于主成分分析和神经网络的蛋白质糖基化位点的预测[D]. 何伟.中南林业科技大学 2010
[5]伪狂犬病毒Ea株主要衣壳蛋白之间的相互作用研究[D]. 薛念波.华中农业大学 2008
本文编号：3172183
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