鸭疫里氏杆菌的分离鉴定和16S rRNA基因扩增

发布时间：2021-05-06 20:35

　　鸭疫里氏杆菌（Riemerella anatipestifer，RA）是对鸭场造成重大经济损失病原菌之一。本试验首先依据鸭疫里氏杆菌的生物学特性建立生理生化鉴定方法；其次还对其16S rRNA （16S ribosomal RNA）进行研究；再次针对外膜蛋白（OuterMembrane Protein A，OmpA）区域的部分基因设计检测引物，建立RA的PCR的检测方法；最后对分离到的RA进行药敏试验。针对外膜蛋白区域部分基因设计的引物具有良好的特异性，不会对大肠杆菌、沙门氏菌、副猪嗜血杆菌、猪丹毒杆菌等发生扩增，可用于临床上对RA的鉴别。试验病料来自于江西丰城地区的鸭场，分别将疑似病鸭脑组织和肝脏组织样品接种于TSA培养基，经过细菌分离纯化，初步共分离到10株疑似RA的菌株，利用建立的PCR检测方法对其进行检测，结果表明，10株可疑菌株均为RA。而后针对RA的16S rRNA设计了一对PCR引物，16S rRNA由于是细菌种属间的高度保守序列，一般不用于细菌鉴定，但可用来分析细菌种属关系。试验表明分离到的RA对庆大霉素、链霉素、氯霉素、阿米卡星、环丙沙星、呋喃唑酮为高度敏感，对青霉素... 

【文章来源】：江西农业大学江西省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
1 文献综述
    1.1 前言
    1.2 传播
    1.3 临床表现
    1.4 病理变化
    1.5 诊断
    1.6 鸭疫里默氏杆菌的鉴定
        1.6.1 细菌培养形态
        1.6.2 细菌形态
    1.7 生化试验
    1.8 血清学特性
    1.9 鉴别诊断
    1.10 疫苗
    1.11 治疗
    1.12 管理
    1.13 预防
第二章 试验研究
    试验一 鸭疫里氏杆菌的分离与鉴定
        1.1 材料与方法
            1.1.1 试验材料
            1.1.2 试验仪器
            1.1.3 细菌菌株
        1.2 细菌培养
        1.3 鸭疫里氏杆菌分离和鉴定
        1.4 生化试验
            1.4.1 生化试验
        1.5 药物敏感性试验
        1.6 小结与讨论
    试验二 鸭疫里氏杆菌 16S rRNA 基因的序列扩增与分析
        2.1 材料与方法
            2.1.1 试验材料
            2.1.2 试验仪器
        2.2 PCR 优化
            2.2.1 温度梯度
            2.2.2 引物浓度
            2.2.3 鸭疫里氏杆菌的特异性
            2.2.4 敏感性试验
        2.3 16S rRNA 基因的回收和转化
        2.4 限制性内切酶
        2.5 小结与讨论
    试验三 鸭疫里氏杆菌的部分 OmpA 基因的扩增与分析
        3.1 材料与方法
            3.1.1 试验材料
            3.1.2 试验仪器
        3.2 温度梯度
        3.3 引物浓度
        3.4 MgCl_2浓度的确定
        3.5 特异性试验
        3.6 鸭疫里氏杆菌的检测
        3.7 小结与讨论
全文总结
致谢
Acknowledgement
Contents
Abbreviation
1 summary of dissertation
    1.1 Introduction
    1.2 Transmission
    1.3 Clinical Signs
    1.4 Lesions
    1.5 Diagnosis
    1.6 Identification of RA
        1.6.1 Colonial morphology
        1.6.2 Cellular Morphology
    1.7 Biochemical and other tests
    1.8 Serological Properties
    1.9 Differential Diagnosis
    1.10 Vaccination
    1.11 Treatment
    1.12 Control
    1.13 Prevention
2 Materials and methods
    2.1 Bacterial strains
    2.2 Cultivation
    2.3 RA isolation and identification
    2.4 Biochemical tests
        2.4.1 Biochemical tests
    2.5 Antimicrobial susceptibility test
3 Sequencing of 16S rRNA
    3.1 PCR Optimization
    3.2 Primer concentration
    3.3 The specificity of the R.anatipestifer
    3.4 DNA sensitivity
    3.5 Amplification of 16S rRNA
    3.6 Restriction enzyme
4 Results
5 OmpA detection
    5.1 Temperature Optimization
    5.2 Primers concentration
    5.3 MgCl2determination
    5.4 The specificity of the OmpA
    5.5 Detection the RA
6 Results
7 Discussion
8 Conclusion
References



本文编号：3172578