自噬调节因子Atg5和Beclin1在不同来源小鼠胚胎早期发育过程中的表达分析

发布时间：2021-05-12 12:49

　　旨在探究自噬调节因子Atg5和Beclin1在胚胎早期发育过程中的表达模式及胚胎的不同生产方式对两种因子表达的影响。本研究将6～8周龄雌性小鼠进行超数排卵,分为2组,一组收集小鼠卵母细胞,孤雌激活处理后进行体外培养;另一组超排小鼠与公鼠1∶1合笼,第2天收集小鼠受精卵进行体外培养;分别在2细胞期、4～8细胞期、桑葚胚期和囊胚期收集不同阶段小鼠孤雌激活胚胎和自然受精胚胎。提取RNA和蛋白,通过实时荧光定量PCR、Western blot等方法检测自噬关键因子Atg5和Beclin1的表达,通过间接免疫荧光法检测Atg5和Beclin1在小鼠囊胚中的表达定位。结果显示,小鼠自然受精和孤雌激活胚胎在发育各时期均可表达Atg5和Beclin1,表达量在胚胎发育的早期呈现出较高的水平,其中二者的表达在小鼠自然受精胚胎中从2细胞期起逐渐降低,而在孤雌激活胚胎的4～8细胞阶段表达量最高,与同期自然受精胚胎差异极显著（P<0.01）;从4细胞期开始,各时期孤雌激活胚胎中Atg5和Beclin1蛋白表达水平均高于自然受精胚胎,差异极显著（P<0.01）;在囊胚中,滋养层细胞和内细胞团中均可检... 

【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(12)北大核心CSCD

【文章页数】：11 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要材料
    1.2 主要试剂
    1.3 主要方法
        1.3.1 小鼠受精卵的采集和培养
        1.3.2 小鼠卵母细胞获取和孤雌激活胚胎的培养
        1.3.3 小鼠胚胎RNA的提取和反转录
        1.3.4 qRT-PCR技术检测Atg5和Beclin1基因的相对表达量
        1.3.5 Western blot检测Atg5、Beclin1蛋白的相对表达量
        1.3.6 Atg5、Beclin1在小鼠囊胚中的表达定位检测
        1.3.7 数据分析
2 结 果
    2.1 小鼠胚胎体外培养
    2.2 核酸电泳检测Atg5和Beclin1基因PCR产物特异性
    2.3 实时荧光定量PCR检测Atg5和Beclin1基因在各发育时期孤雌激活胚胎和自然受精胚胎中的表达
    2.4 Western blot检测Atg5和Beclin1蛋白在各发育时期孤雌激活胚胎和自然受精胚胎中的表达
    2.5 间接免疫荧光检测Atg5和Beclin1蛋白在小鼠不同来源囊胚中的表达定位
3 讨 论
4 结 论


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]Class Ⅲ PI3K/Beclin-1自噬通路参与mmLDL上调小鼠肠系膜动脉ETA受体的研究[D]. 陈琛.南华大学 2019
[2]小鼠孤雌激活胚胎葡萄糖及主要氨基酸代谢水平的分析[D]. 王栋娜.华北理工大学 2015
[3]Atg5-/-小鼠胚胎成纤维细胞耐受活性氧诱导的非自噬依赖的细胞凋亡及其机制[D]. 孙向珏.浙江大学 2010
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本文编号：3183447