氟对小鼠Y染色体微缺失基因的影响及机制研究

发布时间：2021-05-15 19:57

　　[目的]精子发生是在有性生殖的雄性动物睾丸的曲精管中发生的,且过程比较脆弱容易受到外来毒物的毒理作用。本文通过给小鼠染氟,目的是探讨氟化钠是否对雄性小鼠精子发生产生影响以及与其有关的Y染色体微缺失基因的表达产生影响,以便进一步研究氟化物对精子发生产生障碍的机理。[方法]本实验将40只雄性健康的昆明小鼠（第八周）随机分为四个组,分别为对照组（含NaF0ppm的蒸馏水）、低氟组（含NaF25ppm的蒸馏水）、中氟组（含NaF50ppm的蒸馏水）、高氟组（含NaF100ppm的蒸馏水）,且都是饲养11周。染氟期间对所有雄性小鼠的体重进行定期称量并做好记录。染氟结束后,对小鼠的股骨氟含量、睾丸脏器系数比、附睾脏器系数比、精子数目、精子畸形率、血清中睾酮含量和组织中睾酮含量分别进行测定；对小鼠睾丸组织做组织切片后进行形态学观察；通过实时定量PCR（RT-PCR）对与精子发生有关的Y染色体微缺失基因mRNA表达定量分析；通过RT-PCR和酶联免疫吸附法（Elisa）对HSF2的mRNA的表达和蛋白的表达进行定量分析。[结果]1.各染氟组雄性小鼠体重与对照组雄性小鼠体重相比结果没有显著性差异；股骨氟... 

【文章来源】：山西农业大学山西省

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
前言
试验内容
    1 试验材料
        1.1 试验动物
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器和设备
        1.4 主要实验溶液的配制
    2 试验方法
        2.1 试验动物模型的建立
        2.2 样品的采集和前处理
            2.2.1 分离血清
            2.2.2 分离睾丸和附睾
            2.2.3 制备精子悬液
            2.2.4 制备睾丸匀浆
        2.3 主要观察、测定项目与方法
            2.3.1 小鼠生长发育状况的观察及其生长性能的测定
            2.3.2 脏器系数的测定
            2.3.3 小鼠股骨氟含量的测定
            2.3.4 小鼠精子密度的测定
            2.3.5 精子畸形率的测定
            2.3.6 精子头部畸形率的测定
            2.3.7 小鼠睾丸组织形态学观察
            2.3.8 血清和组织中睾酮含量的测定
        2.4 小鼠睾丸Y染色体微缺失基因和HSF2 mRNA表达的检测
            2.4.1 小鼠睾丸总RNA的提取
            2.4.2 睾丸总RNA质量鉴定
            2.4.3 睾丸Y染色体微缺失基因和HSF2引物设计
            2.4.4 RT-PCR反应体系建立
            2.4.5 RT-PCR扩增条件建立
        2.5 HSF2蛋白含量的测定
            2.5.1 小鼠睾丸蛋白的提取
            2.5.2 BCA法测定蛋白浓度
            2.5.3 ELISA检测小鼠热休克转录因子2(HSF2)蛋白的表达
        2.6 数据收集处理和分析
    3 实验结果
        3.1 实验动物的一般情况观察及生长发育状况的测定结果
        3.2 各组小鼠主要脏器重量及脏器系数测定结果
        3.3 小鼠股骨氟含量的测定结果
        3.4 小鼠附睾精子密度的测定结果
        3.5 小鼠附睾精子畸形率的测定结果
        3.6 小鼠附睾精子头部畸形率的测定结果
        3.7 小鼠睾丸组织切片HE染色结果
        3.8 小鼠血清中睾酮含量的测定结果
        3.9 小鼠睾丸组织中睾酮含量的测定结果
        3.10 小鼠睾丸Y染色体微缺失基因和HSF2mRNA表达的检测结果
            3.10.1 睾丸组织中总RNA质量鉴定
            3.10.2 样品扩增的动力学曲线
            3.10.3 样品QRT-PCR溶解曲线
            3.10.4 氟对小鼠睾丸组织中DAZ,RBMY DDX3Y Sly,Ssty2,HSF2mRNA表达影响的结果
        3.11 HSF2蛋白含量的测定结果
    4 分析与讨论
        4.1 动物模型的建立
        4.2 不同浓度的氟对雄性小鼠体重以及睾丸、附睾系数的影响
        4.3 氟化钠对小鼠精液品质的影响
        4.4 氟化钠对雄性小鼠血清和睾丸睾酮激素水平的影响
        4.5 氟化钠对雄性小鼠睾丸组织结构的影响
        4.6 氟化钠对雄性小鼠与精子发生有关的Y染色体微缺失基因
            4.6.1 氟化钠对雄性小鼠精子发生的影响
            4.6.2 Y染色体微缺失基因对精子发生的影响及氟化钠对这些基因的影响
全文结论
参考文献
Abstract
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]醋酸铅对雄性小鼠附睾Y染色体基因Ddx3y蛋白表达的影响[J]. 于丽萍,程繁银,李亚晨,朴丰源.  大连医科大学学报. 2012(03)
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[3]1985～2008年间我国正常男性精液质量变化分析[J]. 黄春妍,姚陈均,王春,江俊康,陈刚.  中华男科学杂志. 2010(08)
[4]氟化钠对雄小鼠生殖功能影响的实验研究[J]. 田风林.  西北民族大学学报(自然科学版). 2010(02)
[5]饮水型大鼠氟中毒动物模型的建立[J]. 吴起清,钟近洁,白生宾,沈岳良.  中国高等医学教育. 2009(03)
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[7]氟化钠皮下注射制作家兔慢性氟中毒动物模型[J]. 张永兴,王全平,王哲.  第四军医大学学报. 2003(24)
[8]氟致雄性大鼠生殖功能损害的实验研究[J]. 崔留欣,姜春霞,王锡林,程学敏.  中国地方病学杂志. 2003(03)
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[10]三氯化铝对小鼠免疫功能影响的研究[J]. 黄波,韦小敏,陆继培,雷珍莲,王清海,莫立凤.  卫生毒理学杂志. 1998(03)

硕士论文
[1]铅对小鼠Y染色体Sxrb区Ddx3y基因表达的影响[D]. 邵小翠.大连医科大学 2011



本文编号：3188244