A型流感病毒M基因对嵌合蝙蝠流感病毒生物学特性的影响
发布时间：2021-05-17 13:35
A型流感病毒的M基因可编码M1基质蛋白和M2离子通道蛋白,它们在病毒感染时发挥重要功能。最近先后从蝙蝠体内发现了H17N10和H18N11两种新亚型,据报道在蝙蝠体内能检测到其它亚型的A型流感病毒,其中H9亚型阳性最高,那么同时存在于蝙蝠体内极有可能发生重组,而重组病毒的潜在危害无法预料,因此本实验尝试探索蝙蝠流感病毒与其它亚型重组之后的特性。论文第一部分通过表面基因及M基因的替换、病毒拯救、细胞生长和小鼠致病性试验,发现在MDCK细胞和小鼠体内,哺乳动物来源流感病毒（PR8,Bat17）的M基因较禽源流感病毒（A2093/H9N2）的M基因,可以显著增强嵌合蝙蝠流感病毒的复制能力和致病力;而在DF1禽源细胞上,则反之,禽源M基因替换蝙蝠源病毒（Bat17）的M基因后可以增强其在DF1细胞上的复制能力,这表明M基因是影响嵌合蝙蝠流感病毒致病性的一个关键因素。论文第二部分通过相应的单抗或多抗进行免疫印迹和免疫荧光鉴定Bat和A2093两种亚型的M1、M2基因的原核表达载体和真核表达载体,以及拯救的病毒。结果显示,两种亚型病毒的M1蛋白无论是原核表达、真核表达还是病毒感染其结果一致,而两种...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略语表
1 前言
1.1 流感病毒的生物学特性
1.1.1 流感病毒的形态
1.1.2 流感病毒的复制
1.2 流感病毒HA、NA、M基因与蛋白的功能
1.2.1 血凝素HA
1.2.2 神经氨酸酶NA
1.2.3 基质蛋白M
1.3 流感病毒的变异
1.3.1 抗原漂移
1.3.2 基因重排
1.4 反向遗传学
1.5 包装信号
1.6 蝙蝠流感的现状
1.7 H9N2禽流感的现状
1.8 研究目的与意义
2 重组嵌合蝙蝠流感病毒的生物学特性研究
2.1 材料
2.1.1 细胞、菌液、鸡胚和小鼠
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器
2.2 方法
2.2.1 嵌合蝙蝠流感病毒的重组与拯救
2.2.2 重组病毒血凝实验(HA)初步鉴定
2.2.3 重组病毒基因测序鉴定
2.2.4 重组嵌合蝙蝠流感病毒在细胞上的生物学特性
2.2.5 重组嵌合蝙蝠流感病毒在动物体内的生物学特性
2.3 结果
2.3.1 嵌合蝙蝠流感病毒表面基因质粒的构建结果
2.3.2 转染后细胞病变结果
2.3.3 重组病毒扩增及HA鉴定结果
2.3.4 重组病毒基因组PCR结果并测序鉴定
2.3.5 病毒滴度TCID_(50)的测定结果
2.3.6 病毒在MDCK、DF1细胞上的生长曲线结果
2.3.7 病毒对小鼠致病性的结果
2.4 讨论与小结
2.4.1 讨论
2.4.2 小结
3 蝙蝠流感病毒与H9N2禽流感病毒M蛋白的免疫原性比较
3.1 材料
3.1.1 载体、质粒、细胞和病毒
3.1.2 主要试剂
3.1.3 抗体
3.1.4 主要仪器
3.2 方法
3.2.1 M1、M2氨基酸比对
3.2.2 M1、M2原核表达载体的构建
3.2.3 M1、M2真核表达载体的构建
3.2.4 M1、M2原核诱导表达
3.2.5 M1、M2原核诱导表达鉴定方法
3.2.6 M1、M2真核转染表达与病毒感染
3.2.7 间接免疫荧光(IFA)检测
3.3 结果
3.3.1 M1、M2氨基酸进化树
3.3.2 M1、M2重组质粒的构建与鉴定
3.3.3 M1、M2原核表达蛋白考马斯亮蓝染色鉴定
3.3.4 M1、M2原核表达蛋白的免疫印迹鉴定
3.3.5 IFA鉴定
3.4 讨论与小结
3.4.1 讨论
3.4.2 小结
4 结论
致谢
参考文献
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]新型蝙蝠流感病毒研究进展[J]. 许凯迪,陈鸿军. 中国动物传染病学报. 2016(06)
[2]H9N2病毒研究进展[J]. 周虹妤,裴磊,毛爱民,冯嘉林,孙科敏. 中国畜牧兽医文摘. 2016(06)
[3]蝙蝠甲型流感病毒H17N10新亚型的研究进展[J]. 谭伟,谢芝勋. 病毒学报. 2015(01)
[4]流感病毒抗原变异的生物学研究进展[J]. 葛少钦. 河北职工医学院学报. 2005(02)
[5]禽流感病毒的变异与效应[J]. 胡勇,林治华,吴胜昔. 重庆三峡学院学报. 2005(03)
[6]用反向遗传操作技术产生致弱的H5亚型重组流感病毒[J]. 卢建红,龙进学,邵卫星,韦栋平,刘秀梵,张艳梅. 微生物学报. 2005(01)
[7]禽流感概述及其控制[J]. 郝俊虎,王仙琴,闫永利,马昕,李萍. 兽药与饲料添加剂. 2004(06)
[8]H9N2亚型禽流感病毒的致病特性研究[J]. 郭霄峰,廖明,辛朝安. 华南农业大学学报. 2001(03)
[9]甲型流感病毒抗原变异的机理[J]. 杨春,余佳. 国外医学.病毒学分册. 1999(03)
博士论文
[1]禽源H9N2 AIV对哺乳动物的感染及其引起肺部细胞因子与蛋白组变化的研究[D]. 黄蓉.山东农业大学 2014
硕士论文
[1]重组蝙蝠流感病毒的生物学特性的研究[D]. 陈莹莹.西北农林科技大学 2017
[2]H9N2亚型禽流感病毒反向遗传操作系统的建立及对哺乳动物致病性的研究[D]. 陈海平.内蒙古农业大学 2009
本文编号：3191854
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略语表
1 前言
1.1 流感病毒的生物学特性
1.1.1 流感病毒的形态
1.1.2 流感病毒的复制
1.2 流感病毒HA、NA、M基因与蛋白的功能
1.2.1 血凝素HA
1.2.2 神经氨酸酶NA
1.2.3 基质蛋白M
1.3 流感病毒的变异
1.3.1 抗原漂移
1.3.2 基因重排
1.4 反向遗传学
1.5 包装信号
1.6 蝙蝠流感的现状
1.7 H9N2禽流感的现状
1.8 研究目的与意义
2 重组嵌合蝙蝠流感病毒的生物学特性研究
2.1 材料
2.1.1 细胞、菌液、鸡胚和小鼠
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器
2.2 方法
2.2.1 嵌合蝙蝠流感病毒的重组与拯救
2.2.2 重组病毒血凝实验(HA)初步鉴定
2.2.3 重组病毒基因测序鉴定
2.2.4 重组嵌合蝙蝠流感病毒在细胞上的生物学特性
2.2.5 重组嵌合蝙蝠流感病毒在动物体内的生物学特性
2.3 结果
2.3.1 嵌合蝙蝠流感病毒表面基因质粒的构建结果
2.3.2 转染后细胞病变结果
2.3.3 重组病毒扩增及HA鉴定结果
2.3.4 重组病毒基因组PCR结果并测序鉴定
2.3.5 病毒滴度TCID_(50)的测定结果
2.3.6 病毒在MDCK、DF1细胞上的生长曲线结果
2.3.7 病毒对小鼠致病性的结果
2.4 讨论与小结
2.4.1 讨论
2.4.2 小结
3 蝙蝠流感病毒与H9N2禽流感病毒M蛋白的免疫原性比较
3.1 材料
3.1.1 载体、质粒、细胞和病毒
3.1.2 主要试剂
3.1.3 抗体
3.1.4 主要仪器
3.2 方法
3.2.1 M1、M2氨基酸比对
3.2.2 M1、M2原核表达载体的构建
3.2.3 M1、M2真核表达载体的构建
3.2.4 M1、M2原核诱导表达
3.2.5 M1、M2原核诱导表达鉴定方法
3.2.6 M1、M2真核转染表达与病毒感染
3.2.7 间接免疫荧光(IFA)检测
3.3 结果
3.3.1 M1、M2氨基酸进化树
3.3.2 M1、M2重组质粒的构建与鉴定
3.3.3 M1、M2原核表达蛋白考马斯亮蓝染色鉴定
3.3.4 M1、M2原核表达蛋白的免疫印迹鉴定
3.3.5 IFA鉴定
3.4 讨论与小结
3.4.1 讨论
3.4.2 小结
4 结论
致谢
参考文献
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]新型蝙蝠流感病毒研究进展[J]. 许凯迪,陈鸿军. 中国动物传染病学报. 2016(06)
[2]H9N2病毒研究进展[J]. 周虹妤,裴磊,毛爱民,冯嘉林,孙科敏. 中国畜牧兽医文摘. 2016(06)
[3]蝙蝠甲型流感病毒H17N10新亚型的研究进展[J]. 谭伟,谢芝勋. 病毒学报. 2015(01)
[4]流感病毒抗原变异的生物学研究进展[J]. 葛少钦. 河北职工医学院学报. 2005(02)
[5]禽流感病毒的变异与效应[J]. 胡勇,林治华,吴胜昔. 重庆三峡学院学报. 2005(03)
[6]用反向遗传操作技术产生致弱的H5亚型重组流感病毒[J]. 卢建红,龙进学,邵卫星,韦栋平,刘秀梵,张艳梅. 微生物学报. 2005(01)
[7]禽流感概述及其控制[J]. 郝俊虎,王仙琴,闫永利,马昕,李萍. 兽药与饲料添加剂. 2004(06)
[8]H9N2亚型禽流感病毒的致病特性研究[J]. 郭霄峰,廖明,辛朝安. 华南农业大学学报. 2001(03)
[9]甲型流感病毒抗原变异的机理[J]. 杨春,余佳. 国外医学.病毒学分册. 1999(03)
博士论文
[1]禽源H9N2 AIV对哺乳动物的感染及其引起肺部细胞因子与蛋白组变化的研究[D]. 黄蓉.山东农业大学 2014
硕士论文
[1]重组蝙蝠流感病毒的生物学特性的研究[D]. 陈莹莹.西北农林科技大学 2017
[2]H9N2亚型禽流感病毒反向遗传操作系统的建立及对哺乳动物致病性的研究[D]. 陈海平.内蒙古农业大学 2009
本文编号：3191854
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