MERTK促进猪瘟病毒复制的分子机制
发布时间：2021-05-17 16:33
病毒不能在细胞外繁殖,只有入侵到宿主细胞后才能复制并产生子代病毒粒子。病毒入侵宿主细胞时需要宿主细胞膜上受体蛋白的参与,同时,这些受体蛋白也决定了不同病毒的宿主范围及组织嗜性。因此,鉴定病毒的细胞受体,明确病毒的入侵机制,可为设计新型抗病毒药物提供靶标,为疫苗研发提供新的思路,对病毒的防控和治疗具有重要意义。猪瘟是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的一种急性、烈性传染病,在多个国家流行,给世界养猪业造成了严重的经济损失。目前,在CSFV入侵方面的研究,仅发现了硫酸乙酰肝素酶（Heparan sulfate,HS）和层粘连蛋白（Laminin receptor,LamR）两个吸附受体,且这两个吸附受体都与CSFV的Erns蛋白存在相互作用。然而,E1和E2蛋白足以介导CSFV的入侵,证明Erns蛋白对CSFV的入侵不是必需的。同时,还有研究表明,E2蛋白可能和某种细胞膜蛋白相互作用进而促进CSFV的入侵,但具体是哪种细胞膜蛋白尚不清楚。为了寻找影响CSFV入侵的细胞膜蛋白,我们分析了两组CSFV感...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：75 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 绪论
1.1 猪瘟与猪瘟病毒
1.1.1 猪瘟
1.1.2 猪瘟病毒
1.2 猪瘟病毒囊膜蛋白的结构及功能
1.2.1 猪瘟病毒囊膜蛋白的结构
1.2.2 猪瘟病毒囊膜蛋白中的二硫键及其功能
1.2.3 猪瘟病毒囊膜糖蛋白的糖基化修饰及其与病毒毒力的关系
1.2.4 猪瘟病毒囊膜糖蛋白中的抗原表位
1.3 猪瘟病毒入侵机制的研究进展
1.3.1 猪瘟病毒的吸附
1.3.2 猪瘟病毒的入侵方式
1.3.3 猪瘟病毒潜在的膜融合机制
1.4 TAM受体蛋白
1.4.1 TAM受体蛋白及其配体结构特点
1.4.2 TAM受体的功能多样性
1.4.3 TAM受体蛋白与病毒感染
1.5 本研究的目的和意义
第二章 MERTK促进猪瘟病毒感染的机制研究
2.1 材料和方法
2.1.1 细胞、毒株和载体
2.1.2 其他实验材料
2.1.3 主要仪器设备
2.1.4 主要试剂的配制
2.1.5 候选分子的siRNA设计及其序列
2.1.6 siRNA下调及CSFV感染试验
2.1.7 rCSFV-Rluc报告病毒的Rluc活性检测
2.1.8 细胞总RNA的提取及反转录
2.1.9 荧光定量RT-qPCR检测不同靶基因的mRNA转录水平
2.1.10 CSFV毒价的测定
2.1.11 间接免疫荧光检测CSFV试验
2.1.12 内源性MERTK蛋白的流式试验验证
2.1.13 稳定过表达MERTK的 PK-15 细胞系的构建
2.1.14 MERTK抗体封闭试验
2.1.15 可溶性MERTK~(ED)-His蛋白和pGas6 蛋白的表达及纯化
2.1.16 可溶性MERTK~(ED)-His蛋白和LDC1267 对细胞活力的影响试验
2.1.17 可溶性MERTK~(ED)-His蛋白阻断试验
2.1.18 猪源Gas6 蛋白和胎牛血清对CSFV感染影响的试验
2.1.19 MERTK和 E2 蛋白的免疫共沉淀试验
2.1.20 Western blotting试验
2.1.21 可溶性MERTK~(ED)-His和 E2 蛋白的表面等粒子体共振(Surface plasmon resonance,SPR)试验
2.1.22 MERTK和 CSFV E2 蛋白在293T细胞中的共定位试验
2.1.23 可溶性MERTK~(ED)-His蛋白处理后对IFN-βmRNA转录水平的影响
2.1.24 抗MERTK多克隆抗体处理后对IFN-βmRNA转录水平的影响
2.1.25 MERTK在 CSFV入侵过程中的作用
2.1.26 LDC1267抑制剂的处理试验
2.1.27 MERTK在 MDBK和 BHK-21 细胞中的受体重建试验
2.1.28 可溶性MERTK~(ED)-His对 BVDV复制影响的检测
2.1.29 可溶性MERTK~(ED)-His对猪PRV TJ复制影响的检测
2.1.30 数据统计学分析
2.2 实验结果
2.2.1 siRNA筛选结果
2.2.2 确认下调MERTK对 CSFV复制的影响
2.2.3 过表达MERTK对 CSFV复制的影响
2.2.4 抗体封闭对CSFV复制的影响
2.2.5 可溶性MERTK~(ED)-His对 CSFV复制的影响
2.2.6 MERTK对基因2型CSFV复制的影响
2.2.7 猪源Gas6 蛋白和胎牛血清对CSFV感染无影响
2.2.8 MERTK与 CSFV E2 蛋白存在相互作用
2.2.9 MERTK可促进CSFV的入侵
2.2.10 LDC1267对CSFV复制的影响
2.2.11 LDC1267在CSFV感染后对宿主固有免疫的影响
2.2.12 LDC1267对CSFV入侵的影响
2.2.13 MERTK对 PRV TJ和 BVDV复制的影响
2.3 讨论
第三章 全文结论
参考文献
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪瘟病毒C株全长cDNA感染性克隆的构建及病毒拯救[J]. 邹兴启,赵启祖,范运峰,朱元源,王琴,徐璐,范学政,宁宜宝. 中国农业科学. 2011(02)
[2]TAM受体的生物学功能[J]. 邓婷婷,韩代书. 中国细胞生物学学报. 2010(04)
[3]猪瘟兔化弱毒疫苗的研究概况[J]. 吴文福,岑小清,任向阳. 广东畜牧兽医科技. 2009(06)
[4]从全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒方法的研究[J]. 范运峰,赵启祖,赵耘,邹兴启,张仲秋,王琴,宁宜宝. 中国畜牧兽医. 2009(06)
[5]猪瘟兔化弱毒疫苗——半个世纪的回顾[J]. 仇华吉,童光志,沈荣显. 中国农业科学. 2005(08)
本文编号：3192088
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：75 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 绪论
1.1 猪瘟与猪瘟病毒
1.1.1 猪瘟
1.1.2 猪瘟病毒
1.2 猪瘟病毒囊膜蛋白的结构及功能
1.2.1 猪瘟病毒囊膜蛋白的结构
1.2.2 猪瘟病毒囊膜蛋白中的二硫键及其功能
1.2.3 猪瘟病毒囊膜糖蛋白的糖基化修饰及其与病毒毒力的关系
1.2.4 猪瘟病毒囊膜糖蛋白中的抗原表位
1.3 猪瘟病毒入侵机制的研究进展
1.3.1 猪瘟病毒的吸附
1.3.2 猪瘟病毒的入侵方式
1.3.3 猪瘟病毒潜在的膜融合机制
1.4 TAM受体蛋白
1.4.1 TAM受体蛋白及其配体结构特点
1.4.2 TAM受体的功能多样性
1.4.3 TAM受体蛋白与病毒感染
1.5 本研究的目的和意义
第二章 MERTK促进猪瘟病毒感染的机制研究
2.1 材料和方法
2.1.1 细胞、毒株和载体
2.1.2 其他实验材料
2.1.3 主要仪器设备
2.1.4 主要试剂的配制
2.1.5 候选分子的siRNA设计及其序列
2.1.6 siRNA下调及CSFV感染试验
2.1.7 rCSFV-Rluc报告病毒的Rluc活性检测
2.1.8 细胞总RNA的提取及反转录
2.1.9 荧光定量RT-qPCR检测不同靶基因的mRNA转录水平
2.1.10 CSFV毒价的测定
2.1.11 间接免疫荧光检测CSFV试验
2.1.12 内源性MERTK蛋白的流式试验验证
2.1.13 稳定过表达MERTK的 PK-15 细胞系的构建
2.1.14 MERTK抗体封闭试验
2.1.15 可溶性MERTK~(ED)-His蛋白和pGas6 蛋白的表达及纯化
2.1.16 可溶性MERTK~(ED)-His蛋白和LDC1267 对细胞活力的影响试验
2.1.17 可溶性MERTK~(ED)-His蛋白阻断试验
2.1.18 猪源Gas6 蛋白和胎牛血清对CSFV感染影响的试验
2.1.19 MERTK和 E2 蛋白的免疫共沉淀试验
2.1.20 Western blotting试验
2.1.21 可溶性MERTK~(ED)-His和 E2 蛋白的表面等粒子体共振(Surface plasmon resonance,SPR)试验
2.1.22 MERTK和 CSFV E2 蛋白在293T细胞中的共定位试验
2.1.23 可溶性MERTK~(ED)-His蛋白处理后对IFN-βmRNA转录水平的影响
2.1.24 抗MERTK多克隆抗体处理后对IFN-βmRNA转录水平的影响
2.1.25 MERTK在 CSFV入侵过程中的作用
2.1.26 LDC1267抑制剂的处理试验
2.1.27 MERTK在 MDBK和 BHK-21 细胞中的受体重建试验
2.1.28 可溶性MERTK~(ED)-His对 BVDV复制影响的检测
2.1.29 可溶性MERTK~(ED)-His对猪PRV TJ复制影响的检测
2.1.30 数据统计学分析
2.2 实验结果
2.2.1 siRNA筛选结果
2.2.2 确认下调MERTK对 CSFV复制的影响
2.2.3 过表达MERTK对 CSFV复制的影响
2.2.4 抗体封闭对CSFV复制的影响
2.2.5 可溶性MERTK~(ED)-His对 CSFV复制的影响
2.2.6 MERTK对基因2型CSFV复制的影响
2.2.7 猪源Gas6 蛋白和胎牛血清对CSFV感染无影响
2.2.8 MERTK与 CSFV E2 蛋白存在相互作用
2.2.9 MERTK可促进CSFV的入侵
2.2.10 LDC1267对CSFV复制的影响
2.2.11 LDC1267在CSFV感染后对宿主固有免疫的影响
2.2.12 LDC1267对CSFV入侵的影响
2.2.13 MERTK对 PRV TJ和 BVDV复制的影响
2.3 讨论
第三章 全文结论
参考文献
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪瘟病毒C株全长cDNA感染性克隆的构建及病毒拯救[J]. 邹兴启,赵启祖,范运峰,朱元源,王琴,徐璐,范学政,宁宜宝. 中国农业科学. 2011(02)
[2]TAM受体的生物学功能[J]. 邓婷婷,韩代书. 中国细胞生物学学报. 2010(04)
[3]猪瘟兔化弱毒疫苗的研究概况[J]. 吴文福,岑小清,任向阳. 广东畜牧兽医科技. 2009(06)
[4]从全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒方法的研究[J]. 范运峰,赵启祖,赵耘,邹兴启,张仲秋,王琴,宁宜宝. 中国畜牧兽医. 2009(06)
[5]猪瘟兔化弱毒疫苗——半个世纪的回顾[J]. 仇华吉,童光志,沈荣显. 中国农业科学. 2005(08)
本文编号：3192088
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