亚甲蓝对猪卵母细胞体外成熟及其孤雌胚发育的影响

发布时间：2021-05-18 23:33

　　亚甲蓝（Methylene blue,MB）是一种广泛应用于生物和医学领域的一种吩噻嗪盐,研究表明MB在线粒体中可以充当电子载体增强呼吸链功能,减轻细胞线粒体损伤、改善氧化应激和提高线粒体中ATP生成。目前尚未见亚甲蓝对生殖细胞保护作用的研究报道。因此,本研究旨在探讨亚甲蓝对猪卵母细胞体外成熟（In Vitro Maturation,IVM）和孤雌胚胎体外发育的影响,为进一步优化猪卵母细胞体外成熟体系提供理论依据。首先探讨IVM液添加不同浓度MB（对照组:0nM;试验组:10nM、50nM、100nM、200nM）处理40h-44h后对猪卵母细胞的影响。通过统计卵丘细胞扩展情况及卵母细胞第一极体排出率、MⅡ期卵母细胞孤雌激活后早期胚胎卵裂率、囊胚率,得出较优MB处理浓度。结果显示,体外成熟培养液中添加10nmol/L浓度MB组的卵丘细胞扩展分值（2.588±0.018）和卵母细胞第一极体排出率（69.73±3.56）显著高于0nmol/L对照组（2.372±0.029、60.13±3.31）（P<0.05）;随后,孤雌激活早期胚胎发育后显示,10nmol/L处理组的卵裂率（84.... 

【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词表
文献综述
    1.卵母细胞体外成熟研究进展
        1.1 卵母细胞的发育
            1.1.1 卵母细胞核成熟
            1.1.2 卵母细胞质成熟
        1.2 影响卵母细胞体外成熟的因素
            1.2.1 卵母细胞来源
            1.2.2 卵泡和卵泡液
            1.2.3 卵丘颗粒细胞
            1.2.4 培养体系
            1.2.5 氧化应激
    2.线粒体与卵细胞成熟
        2.1 卵细胞中线粒体形态及分布
        2.2 卵细胞中线粒体功能
    3.亚甲蓝研究进展
        3.1 关于亚甲蓝
        3.2 亚甲蓝的分子结构和生化特性
        3.3 亚甲蓝对线粒体作用
        3.4 亚甲蓝具有增强能量代谢和抗氧化剂功能
        3.5 亚甲蓝副作用
试验研究
    试验一 亚甲蓝对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响
        1.材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 猪卵巢的来源
                1.1.2 主要仪器
                1.1.3 主要试剂
            1.2 方法
                1.2.1 试剂配制
                1.2.2 猪卵丘卵母细胞复合体(COCs)的收集
                1.2.3 MB对COCs起始阶段猪卵母细胞体外成熟的影响
                1.2.4 MB对PBI起始阶段孤雌胚体外发育的影响
            1.3 数据处理
        2.结果
            2.1 不同发育阶段猪卵母细胞形态特征
                2.1.1 卵丘卵母细胞复合体
                2.1.2 卵母细胞中第一极体
                2.1.3 各阶段卵母细胞卵裂
                2.1.4 卵母细胞囊胚
            2.2 MB对 COCs起始阶段猪卵母细胞体外成熟的影响
                2.2.1 COCs扩展指数分析
                2.2.2 第一极体(PBI)排出率统计
                2.2.3 孤雌激活后卵裂率、囊胚率统计
            2.3 MB对PBI起始阶段孤雌胚体外发育的影响
        3.分析与讨论
        4.小结
    试验二 亚甲蓝对猪卵母细胞体外成熟作用机制的研究
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 猪卵巢的来源
                1.1.2 主要仪器
                1.1.3 主要试剂
                1.1.4 引物设计及合成
            1.2 试验方法
                1.2.1 卵母细胞的收集
                1.2.2 亚甲蓝对猪卵母细胞体外成熟的影响
                1.2.3 活性氧簇(ROS)含量的检测
                1.2.4 总谷胱甘肽(GSH)含量测定
                1.2.5 线粒体膜电位(JC-1)含量测定
                1.2.6 卵母细胞微量RNA提取反转录扩增
                1.2.7 普通PCR
                1.2.8 实时荧光定量PCR
            1.3 数据分析
        2 结果
            2.1 成熟液中添加亚甲蓝对猪卵母细胞内ROS水平影响
            2.2 成熟液中添加亚甲蓝对猪卵母细胞内总谷胱甘肽含量的影响
            2.3 成熟液中添加亚甲蓝对猪卵母细胞内线粒体膜电位(JC-1)含量测定
            2.4 成熟液中添加亚甲蓝对卵母细胞基因表达的影响
            2.5 成熟液中添加亚甲蓝对猪卵母细胞母体发育基因表达的影响
        3 分析与讨论
        4 小结
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3194670