牛病毒性腹泻病毒囊膜蛋白E rns /E2的原核表达及噬菌体展示anti-BVDV纳米抗体文库的构建

发布时间：2021-05-19 08:21

　　牛病毒性腹泻/粘膜病（Bovineviraldiarrhea/mucosaldisease）是由牛病毒性腹泻病毒引起的、主要发生于牛的一种急性、热性传染病，其临诊特征为黏膜发炎、糜烂、坏死和腹泻。本病呈世界性分布，广泛存在于欧美等许多养牛业发达的国家。自1980年以来我国从国外引进奶牛和种牛，将本病传入我国，并对病毒进行了分离鉴定。发达国家针对感染牛群多采取大量淘汰或屠杀，目前尚无有效的疫苗对BVDV进行预防，给畜牧业生产造成巨大的经济损失，促使人们不断寻求新的防治BVDV的途径，以便更好的控制该病的发生和流行。自杂交瘤细胞技术问世，单克隆抗体已被广泛用于疾病的诊断和治疗。抗体来自于有机体，使用过程中无毒性，在人们看来抗体用于治疗疾病似乎具有无限的潜力。然而传统的单克隆抗体依然存在各种缺陷，比如：体积大、稳定性差、制备工艺繁琐、耗资高、必须人源化等。驼科动物和鲨鱼体内存在一种特殊的天然缺失轻链的重链抗体。这种重链抗体的可变区序列具有体积小、容易获得、高水溶性和稳定性、能够识别沟槽或缝隙间的抗原表位及结合活性好等优点，被称作是单域抗体，又称纳米抗体。鉴于单域抗体的这些优点，已被广泛应用于... 

【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
英文缩略表
引言
第一章 文献综述
    综述一 牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的研究进展
        1 BVDV概述
            1.1 BVDV病毒特性
            1.2 病毒的生物型
        2 病毒基因组及其编码蛋白
            2.1 病毒基因组
            2.2 编码结构蛋白
            2.3 编码的非结构蛋白
        3 BVDV感染抑制宿主的免疫反应
            3.1 BVDV感染抑制宿主适应性免疫
            3.2 BVDV感染抑制宿主固有免疫
    综述二 纳米抗体的研究进展
        1 纳米抗体的概述
            1.1 纳米抗体的发现
            1.2 纳米抗体的结构及功能
            1.3 纳米抗体的特性
        2 纳米抗体在抗感染中的应用
            2.1 VHH抗细菌的应用
            2.2 纳米抗体用于抵抗真菌生物和寄生虫
            2.3 VHH靶向病毒
第二章 试验研究
    实验一 牛病毒性腹泻病毒E~(RNS)、E2蛋白的表达纯化
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 目的基因的扩增
            2.2 重组质粒PMD19-T-E~(RNS)/E2的鉴定结果
            2.3 重组表达质粒的鉴定
            2.4 原核产物的表达
        3 讨论
            3.1 牛病毒性腹泻病毒囊膜蛋白E2、E~(RNS)的研究
            3.2 原核表达载体的构建及蛋白的诱导表达
            3.3 包涵体纯化应注意的问题
        4 小结
    实验二 噬菌体展示ANTI-BVDV纳米抗体文库的构建
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 病毒增殖
            2.2 常规微量法测定BVDV-NADL株TCID50
            2.3 全病毒抗原的灭活检测
            2.4 免疫后抗体效价的测定
            2.5 总RNA的提取与分析
            2.6 纳米抗体基因（VHH）的扩增
            2.7 重组质粒PCANTAB5E-VHH酶切鉴定
            2.8 初始文库的抗体序列多样性和库容量测定
            2.9 噬菌体抗体库的库容量测定
        3 讨论
            3.1 驼源单域抗体基因序列的扩增
            3.2 噬菌体抗体库的构建
        4 小结
结论
创新点
参考文献
附录：主要试剂的配制
    一、分子克隆所需试剂的配制
    二、蛋白表达与纯化所需试剂的配制
    三、细胞培养所需试剂的配制
    四、试剂盒操作说明书
致谢
作者简介
导师评阅表


【参考文献】：
期刊论文
[1]噬菌体抗体库技术的研究进展及应用[J]. 王凯,刘洪艳,牟玲.  微生物学杂志. 2011(06)
[2]具有荧光标签的猪瘟病毒Erns蛋白在杆状病毒表达系统中的表达[J]. 陈柳,余斌,云涛,倪征,华炯钢,李双茂.  华北农学报. 2011(01)
[3]牦牛病毒性腹泻/黏膜病和传染性鼻气管炎血清学调查[J]. 韩志辉,圈华,贺晓龙,魏科峰,额尔德尼扎布.  中国动物传染病学报. 2010(06)
[4]牛病毒性腹泻的研究概况[J]. 谢西锋,崔保安.  中国兽医杂志. 2001(11)
[5]双抗体夹心ELISA检测牛病毒性腹泻病毒的研究[J]. 王新平,任文陟,朱维正,李佑民,宣华,常国权,丁壮.  中国兽医学报. 1995(03)
[6]牛病毒性腹泻—粘膜病病毒株（长春184）的分离与鉴定[J]. 李佑民,刘振润,武银莲.  兽医大学学报. 1983(02)



本文编号：3195451