苏丹型埃博拉病毒病毒样颗粒的制备与实验免疫研究
发布时间：2021-05-20 01:50
埃博拉病毒（Ebola virus,EBOV）属于丝状病毒属,能引起人类和非人灵长类严重的出血热,具有50%90%的死亡率,对全球公共卫生安全造成严重威胁,据WHO报道,截止2016年6月10日,全球已确诊及疑似感染病例28 616,其中死亡人数达11 310,且于2018年5月8日在刚果金再发暴发,截至5月21日此次暴发累计疑似病例58例,其中28例确诊,27人死亡。苏丹型埃博拉病毒（Sudan virus,SUDV）引起的苏丹型埃博拉病毒病曾暴发于1976、1979、2000、2004、2011以及2012年,平均死亡率为53.76%,是除扎伊尔型埃博拉病毒（Zaire Ebolavirus,ZEBOV）外致死率及暴发率最高的病毒亚型,但是目前为止仍没有上市的可有效预防或控制苏丹型埃博拉病毒病频发暴发的疫苗和药物。因此研发一种安全有效的针对SUDV的疫苗对预防和控制SUDV的感染具有重要的意义。病毒样颗粒（Virus-like particles,VLPs）是由病毒的一种或多种结构蛋白组成的高度有序的重复结构,VLPs依赖于病毒蛋白自然结合的天然能力,形成与活...
【文章来源】：军事科学院北京市
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文缩略词表
摘要
Abstract
前言
第一章 苏丹型埃博拉病毒抗体间接ELISA检测方法的建立
1.1 材料
1.1.1 菌株、载体和血清
1.1.2 试剂和仪器
1.1.3 溶液配制
1.2 方法
1.2.1 引物设计与合成
1.2.2 目的片段的扩增及重组质粒的构建
1.2.3 SUDV GP重组蛋白表达及纯化
1.2.4 SUDV GP抗体间接ELISA检测方法的建立
1.2.5 ELISA方法的验证
1.3 结果
1.3.1 GP基因的扩增与重组表达质粒的鉴定
1.3.2 SUDV GP重组蛋白的表达及纯化
1.3.3 重组蛋白SUDV GP的鉴定
1.3.4 SUDV GP抗体间接ELISA检测方法的建立
1.3.5 ELISA方法的验证
1.4 讨论
1.5 小结
第二章 苏丹型埃博拉病毒病毒样颗粒的构建与鉴定
2.1 材料
2.1.1 基因、载体、细胞及抗体
2.1.2 主要试剂及试剂盒
2.1.3 主要溶液及配方
2.1.4 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 基因合成
2.2.2 引物设计及合成
2.2.3 SUDV GP和VP40片断扩增及纯化回收
2.2.4 重组质粒pFD-GP-GP和pFD-VP40-VP40的构建
2.2.5 重组杆粒rBacmid-GP-GP和rBacmid-VP40-VP40的制备
2.2.6 重组杆粒rBacmid-GP-GP和rBacmid-VP40-VP40的鉴定
2.2.7 重组杆状病毒rBac-GP-GP和rBac-VP40-VP40的拯救
2.2.8 重组杆状病毒rBac-GP-GP和rBac-VP40-VP40的鉴定
2.2.9 苏丹型埃博拉病毒病毒样颗粒的制备
2.2.10 苏丹型埃博拉病毒病毒样颗粒的鉴定
2.3 结果
2.3.1 SUDV GP基因和VP40基因的扩增
2.3.2 重组质粒pFD-GP-GP和pFD-VP40-VP40的鉴定
2.3.3 重组杆粒rBacmid-GP-GP和rBacmid-VP40-VP40的鉴定
2.3.4 重组杆状病毒rBac-GP-GP和rBac-VP40-VP40的鉴定
2.3.5 苏丹型埃博拉病毒病毒样颗粒的鉴定
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 苏丹型埃博拉病毒病毒样颗粒实验免疫研究
3.1 材料
3.1.1 实验动物
3.1.2 免疫原及佐剂
3.1.3 试剂
3.1.4 溶液配制
3.2 方法
3.2.1 最佳佐剂的筛选
3.2.2 小鼠免疫
3.2.3 ELISA检测SUDV VLP免疫小鼠IgG抗体
3.2.4 假病毒检测SUDV VLP免疫小鼠中和抗体
3.2.5 B细胞活化流式分析
3.2.6 IFN-γ与IL-4酶联免疫斑点检测
3.2.7 ELISA检测细胞因子
3.3 结果
3.3.1 最佳佐剂的筛选
3.3.2 SUDV VLPs免疫小鼠抗体效价检测
3.3.3 免疫小鼠淋巴结B细胞活化
3.3.4 IFN-γ与IL-4分泌检测
3.3.5 ELISA检测细胞因子分泌量
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 结论和展望
参考文献
作者在学期间取得的学术成果
主要简历
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]埃博拉病毒包膜糖蛋白研究进展[J]. 丁国永,王志玉,高璐,姜宝法. 病毒学报. 2013(02)
[2]埃博拉病毒NP蛋白的单克隆抗体制备及抗原肽的定位[J]. 王晓杜,刘阳,王皓婷,史子学,赵凡凡,魏建超,邵东华,马志永. 生物工程学报. 2012(11)
博士论文
[1]中东呼吸综合征冠状病毒病毒样颗粒的构建与应用研究[D]. 王翀.东北林业大学 2016
[2]狂犬病病毒样颗粒的构建、制备及免疫效果评价[D]. 齐瑛琳.吉林大学 2015
硕士论文
[1]PPRV病毒样颗粒的构建、制备及免疫原性研究[D]. 闫飞虎.中国人民解放军军事医学科学院 2016
[2]狂犬病病毒样颗粒免疫原的制备与实验免疫研究[D]. 孙宏宇.吉林农业大学 2016
[3]重组埃博拉VLP疫苗制备及免疫效果初步研究[D]. 任天宇.宁夏医科大学 2015
本文编号：3196845
【文章来源】：军事科学院北京市
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文缩略词表
摘要
Abstract
前言
第一章 苏丹型埃博拉病毒抗体间接ELISA检测方法的建立
1.1 材料
1.1.1 菌株、载体和血清
1.1.2 试剂和仪器
1.1.3 溶液配制
1.2 方法
1.2.1 引物设计与合成
1.2.2 目的片段的扩增及重组质粒的构建
1.2.3 SUDV GP重组蛋白表达及纯化
1.2.4 SUDV GP抗体间接ELISA检测方法的建立
1.2.5 ELISA方法的验证
1.3 结果
1.3.1 GP基因的扩增与重组表达质粒的鉴定
1.3.2 SUDV GP重组蛋白的表达及纯化
1.3.3 重组蛋白SUDV GP的鉴定
1.3.4 SUDV GP抗体间接ELISA检测方法的建立
1.3.5 ELISA方法的验证
1.4 讨论
1.5 小结
第二章 苏丹型埃博拉病毒病毒样颗粒的构建与鉴定
2.1 材料
2.1.1 基因、载体、细胞及抗体
2.1.2 主要试剂及试剂盒
2.1.3 主要溶液及配方
2.1.4 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 基因合成
2.2.2 引物设计及合成
2.2.3 SUDV GP和VP40片断扩增及纯化回收
2.2.4 重组质粒pFD-GP-GP和pFD-VP40-VP40的构建
2.2.5 重组杆粒rBacmid-GP-GP和rBacmid-VP40-VP40的制备
2.2.6 重组杆粒rBacmid-GP-GP和rBacmid-VP40-VP40的鉴定
2.2.7 重组杆状病毒rBac-GP-GP和rBac-VP40-VP40的拯救
2.2.8 重组杆状病毒rBac-GP-GP和rBac-VP40-VP40的鉴定
2.2.9 苏丹型埃博拉病毒病毒样颗粒的制备
2.2.10 苏丹型埃博拉病毒病毒样颗粒的鉴定
2.3 结果
2.3.1 SUDV GP基因和VP40基因的扩增
2.3.2 重组质粒pFD-GP-GP和pFD-VP40-VP40的鉴定
2.3.3 重组杆粒rBacmid-GP-GP和rBacmid-VP40-VP40的鉴定
2.3.4 重组杆状病毒rBac-GP-GP和rBac-VP40-VP40的鉴定
2.3.5 苏丹型埃博拉病毒病毒样颗粒的鉴定
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 苏丹型埃博拉病毒病毒样颗粒实验免疫研究
3.1 材料
3.1.1 实验动物
3.1.2 免疫原及佐剂
3.1.3 试剂
3.1.4 溶液配制
3.2 方法
3.2.1 最佳佐剂的筛选
3.2.2 小鼠免疫
3.2.3 ELISA检测SUDV VLP免疫小鼠IgG抗体
3.2.4 假病毒检测SUDV VLP免疫小鼠中和抗体
3.2.5 B细胞活化流式分析
3.2.6 IFN-γ与IL-4酶联免疫斑点检测
3.2.7 ELISA检测细胞因子
3.3 结果
3.3.1 最佳佐剂的筛选
3.3.2 SUDV VLPs免疫小鼠抗体效价检测
3.3.3 免疫小鼠淋巴结B细胞活化
3.3.4 IFN-γ与IL-4分泌检测
3.3.5 ELISA检测细胞因子分泌量
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 结论和展望
参考文献
作者在学期间取得的学术成果
主要简历
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]埃博拉病毒包膜糖蛋白研究进展[J]. 丁国永,王志玉,高璐,姜宝法. 病毒学报. 2013(02)
[2]埃博拉病毒NP蛋白的单克隆抗体制备及抗原肽的定位[J]. 王晓杜,刘阳,王皓婷,史子学,赵凡凡,魏建超,邵东华,马志永. 生物工程学报. 2012(11)
博士论文
[1]中东呼吸综合征冠状病毒病毒样颗粒的构建与应用研究[D]. 王翀.东北林业大学 2016
[2]狂犬病病毒样颗粒的构建、制备及免疫效果评价[D]. 齐瑛琳.吉林大学 2015
硕士论文
[1]PPRV病毒样颗粒的构建、制备及免疫原性研究[D]. 闫飞虎.中国人民解放军军事医学科学院 2016
[2]狂犬病病毒样颗粒免疫原的制备与实验免疫研究[D]. 孙宏宇.吉林农业大学 2016
[3]重组埃博拉VLP疫苗制备及免疫效果初步研究[D]. 任天宇.宁夏医科大学 2015
本文编号：3196845
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