猪细小病毒感染ST细胞可诱发自噬并促进病毒的复制
发布时间：2021-05-22 18:35
猪细小病毒病（Porcine parvovirus infection,PPI）是由猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）引起的一种病毒性传染病。该病主要临床表现为胚胎以及胎儿的感染,发生畸形胎、木乃伊胎甚至死胎。PPV是造成母猪繁殖障碍的主要原因之一,对养猪业构成了巨大威胁,造成了全球范围内的巨大经济损失。自噬是细胞自我防御和自我保护的一种生理过程,尽管许多病毒在进入细胞或复制时可引起细胞自噬,但自噬和PPV感染之间的关系尚未见报道。因此本文将研究PPV感染猪睾丸细胞（ST）后对细胞自噬的影响,同时研究自噬是否能够促进PPV病毒的复制。本文应用Western blot、间接免疫荧光和荧光定量PCR方法对PPV感染ST细胞后自噬的发生及其自噬与病毒复制之间的互作机制进行了研究。结果如下:Western blot实验表明,随着时间延长,雷帕霉素处理组和PPV感染组与正常对照组相比,LC3-I向LC3-II的转化增加,p62的水平显著降低。间接免疫荧光检测表明PPV感染ST细胞中出现大量阳性荧光斑点状GFP-LC3蛋白,与雷帕霉素处理组相似,而在正常对照组细胞中GFP-...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 引言
1.1 猪细小病毒病的研究进展
1.1.1 猪细小病毒的基因组结构
1.1.2 猪细小病毒的主要蛋白和功能
1.1.3 猪细小病毒病流行病学
1.1.4 猪细小病毒致病机制
1.1.5 猪细小病毒病临床症状和病理变化
1.1.6 猪细小病毒病的诊断
1.1.7 猪细小病毒病的防治
1.2 自噬
1.2.1 自噬分类及特征
1.2.2 自噬的过程
1.2.3 自噬的检测
1.2.4 自噬的生理意义
1.2.5 自噬与病毒感染的相互作用
1.3 研究目的和意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验病毒株、细胞与菌种
2.1.2 试剂盒、工具酶、抗体以及试剂
2.1.3 主要试剂的配制及保存
2.1.4 实验仪器与设备
2.2 实验方法
2.2.1 PPV感染ST细胞条件的建立
2.2.2 Westernblot检测PPV感染ST细胞后自噬相关蛋白的变化
2.2.3 间接免疫荧光检测PPV感染ST细胞后GFP-LC3荧光变化
2.2.4 透射电镜观察PPV诱导ST细胞的自噬体形成
2.2.5 Westernblot检测自噬对病毒复制的影响
2.2.6 TCID50方法检测自噬对病毒复制的影响
2.2.7 实时荧光定量PCR检测自噬对病毒复制的影响
2.2.8 统计学分析
3 结果
3.1 PPV感染ST细胞条件的建立
3.1.1 PPV感染ST细胞CPE的观察
3.1.2 PPV感染ST细胞后的PCR鉴定
3.1.3 PPVTCID50的测定
3.2 PPV诱导ST细胞自噬的产生
3.2.1 Westernblot检测PPV感染ST细胞后自噬相关蛋白的变化
3.2.2 间接免疫荧光检测PPV感染ST细胞后GFP-LC3荧光变化
3.2.3 PPV感染ST细胞后自噬泡的电镜观察
3.3 自噬对病毒复制的影响
3.3.1 Westernblot分析自噬对病毒复制的影响
3.3.2 病毒滴度TCID50的测定
3.3.3 实时荧光定量PCR检测病毒拷贝数
4 讨论
4.1 PPV病毒诱导ST细胞自噬的发生
4.1.1 Westernblot检测PPV感染ST细胞后自噬相关蛋白的变化
4.1.2 间接免疫荧光检测PPV感染ST细胞后GFP-LC3荧光变化
4.1.3 透射电镜分析病毒诱导自噬体的产生
4.2 PPV感染ST细胞引起自噬并促进其复制
4.2.1 Westernblot分析自噬对病毒复制的影响
4.2.2 病毒滴度TCID50的检测和分析
4.2.3 PPV拷贝数的检测和分析
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
本文编号：3201481
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
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摘要
英文摘要
1 引言
1.1 猪细小病毒病的研究进展
1.1.1 猪细小病毒的基因组结构
1.1.2 猪细小病毒的主要蛋白和功能
1.1.3 猪细小病毒病流行病学
1.1.4 猪细小病毒致病机制
1.1.5 猪细小病毒病临床症状和病理变化
1.1.6 猪细小病毒病的诊断
1.1.7 猪细小病毒病的防治
1.2 自噬
1.2.1 自噬分类及特征
1.2.2 自噬的过程
1.2.3 自噬的检测
1.2.4 自噬的生理意义
1.2.5 自噬与病毒感染的相互作用
1.3 研究目的和意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验病毒株、细胞与菌种
2.1.2 试剂盒、工具酶、抗体以及试剂
2.1.3 主要试剂的配制及保存
2.1.4 实验仪器与设备
2.2 实验方法
2.2.1 PPV感染ST细胞条件的建立
2.2.2 Westernblot检测PPV感染ST细胞后自噬相关蛋白的变化
2.2.3 间接免疫荧光检测PPV感染ST细胞后GFP-LC3荧光变化
2.2.4 透射电镜观察PPV诱导ST细胞的自噬体形成
2.2.5 Westernblot检测自噬对病毒复制的影响
2.2.6 TCID50方法检测自噬对病毒复制的影响
2.2.7 实时荧光定量PCR检测自噬对病毒复制的影响
2.2.8 统计学分析
3 结果
3.1 PPV感染ST细胞条件的建立
3.1.1 PPV感染ST细胞CPE的观察
3.1.2 PPV感染ST细胞后的PCR鉴定
3.1.3 PPVTCID50的测定
3.2 PPV诱导ST细胞自噬的产生
3.2.1 Westernblot检测PPV感染ST细胞后自噬相关蛋白的变化
3.2.2 间接免疫荧光检测PPV感染ST细胞后GFP-LC3荧光变化
3.2.3 PPV感染ST细胞后自噬泡的电镜观察
3.3 自噬对病毒复制的影响
3.3.1 Westernblot分析自噬对病毒复制的影响
3.3.2 病毒滴度TCID50的测定
3.3.3 实时荧光定量PCR检测病毒拷贝数
4 讨论
4.1 PPV病毒诱导ST细胞自噬的发生
4.1.1 Westernblot检测PPV感染ST细胞后自噬相关蛋白的变化
4.1.2 间接免疫荧光检测PPV感染ST细胞后GFP-LC3荧光变化
4.1.3 透射电镜分析病毒诱导自噬体的产生
4.2 PPV感染ST细胞引起自噬并促进其复制
4.2.1 Westernblot分析自噬对病毒复制的影响
4.2.2 病毒滴度TCID50的检测和分析
4.2.3 PPV拷贝数的检测和分析
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
本文编号：3201481
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3201481.html
