多型FMDV的VP1表位基因在S-层蛋白嵌入型亚单位疫苗载体的构建及其初步鉴定
发布时间：2021-05-23 00:04
口蹄疫（Foot-and-mouth disease, FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth virus disease, FMDV）引起的一种急性、热性和高度接触性传染病,主要感染牛、猪和羊等多种家畜和野生哺乳动物,对畜牧产业和国民经济造成严重的损失。FMD已经成世界性分布。虽然化学方法灭活的全病毒疫苗在FMD的预防和控制过程中发挥着重要的作用,但是,在疫苗应用实践中凸显出很多不足。如纯化病毒颗粒难度大,病毒株储存条件苛刻,疫苗接种免疫效果不稳定等。更为重要的潜在危险还有在疫苗大规模生产过程中,FMDV的未完全灭活和来自疫苗生产期间从生物安全设施中逃脱的活病毒等。此外,多年以来我国的FMD疫情表现了0、A、Asia I多个血清型交替流行,单一种类型疫苗难以成效,导致疫苗免疫效果不尽人意。本研究应用PCR方法从嗜酸性乳杆菌基因组DNA中成功扩增出约1200bp的S-层蛋白全基因。应用CPH models-3.0（http://www.cbs.dtu.dk/services/CPHmodels）、 Swiss-Model和Swiss-PdbViewer等3种在线软件成功预...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
1.1 S-层蛋白概述
1.1.1 乳酸杆菌S-层蛋白
1.1.2 关于S-层蛋白的应用
1.2 关于口蹄疫的概述
1.2.1 口蹄疫病毒及其结构蛋白
1.2.2 VP1蛋白质的特征
1.2.3 VP1蛋白的抗原性
1.3 本研究的目的和意义
2 嗜酸乳杆菌MG株S-层蛋白的高级结构预测分析及原核表达
2.1 材料
2.1.1 质粒与菌种
2.1.2 工具酶及试剂
2.1.3 仪器与设备
2.1.4 引物设计
2.2 方法
2.2.1 嗜酸乳杆菌的s1p基因PCR扩增
2.2.2 嗜酸乳杆菌的s1p基因PCR扩增产物的纯化
2.2.3 嗜酸乳杆菌的s1p基因的连接与转化
2.2.4 SLP蛋白质的三级结构预测
2.2.5 原核表达载体pGEX-slp的构建
2.2.6 重组质粒表达条件的优化
2.2.7 SDS-PAGE电泳
2.2.8 Western blotting检测
2.3 结果
2.3.1 s助基因的PCR扩增产物
2.3.2 pMD-s1p双酶切鉴定
2.3.3 嗜酸乳杆菌SLP蛋白质的氨基酸序列的预测
2.3.4 SLP蛋白质的高级结构预测
2.3.5 重组载体pGEX-slp的酶切鉴定和PCR鉴定
2.3.6 s助基因原核表达条件的优化
2.3.7 SDS-PAGE与Western blotting分析结果
2.4 讨论
3 多型口蹄疫病毒VP1基因表位嵌入型S-层蛋白原核表达载体的构建
3.1 材料
3.1.1 重组质粒与VP1基因来源
3.1.2 工具酶和试剂
3.1.3 仪器与设备
3.2 方法
3.2.1 3型口蹄疫病毒的VP1的核苷酸序列分析
3.2.2 3型口蹄疫病毒的VP1的氨基酸序列分析
3.2.3 3型口蹄疫病毒的VP1的表面特性分析
3.2.4 重组表达载体的构建
3.2.5 重组表达质粒的诱导表达
3.2.6 表达产物的鉴定
3.3 结果
3.3.1 3型口蹄疫病毒的VP1的核酸分析
3.3.2 3型口蹄疫病毒的VP1的氨基酸分析
3.3.3 3型口蹄疫病毒的VP1的表面特性分析
3.3.4 重组质粒pGEX-s1p-MultiVP1的双酶切鉴定
3.3.5 SDS-PAGE电泳
3.3.6 Western blotting检测
3.4 讨论
4 结论
致谢
参考文献
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]负载重组口蹄疫病毒VP4蛋白的树突状细胞启动的T细胞应答[J]. 安鹏丽,李娜,李丽敏,张丽,张雷,高云欢,王家鑫. 畜牧兽医学报. 2012(10)
[2]A型口蹄疫病毒VP3基因的克隆及原核表达[J]. 刘航,杨晓燕,刘明,赵海波,郭华花,田永强. 江苏农业科学. 2012(06)
[3]乳酸杆菌S-层蛋白对鼠伤寒沙门氏菌黏附及入侵Caco-2细胞的拮抗作用[J]. 李鹏成,叶小兰,王志胜,庾庆华,杨倩. 微生物学报. 2010(09)
[4]几种乳酸菌S-层蛋白的普查以及slp基因的克隆与序列分析[J]. 双杰,包秋华,永胜,王艳霞,张和平,格日勒图. 中国乳品工业. 2010(08)
[5]Asia 1型口蹄疫病毒VP1基因的表达鉴定及其多抗制备[J]. 朱远茂,任宪刚,史鸿飞,高欲燃,于作,冯军科,相文华,薛飞. 中国预防兽医学报. 2010(04)
[6]口蹄疫新型疫苗研究进展[J]. 曹轶梅,卢曾军,田飞鹏,刘在新. 微生物学通报. 2009(11)
[7]含RGD受体结合位点口蹄疫病毒Asia1/JS/China/2005株的拯救及初步鉴定[J]. 李平花,白兴文,曹伟军,卢曾军,孙普,殷宏,刘在新. 微生物学报. 2009(07)
[8]一种重组口蹄疫疫苗的原核表达、纯化及其活性检测[J]. 董博翰,王华,胡小平,房明丽,张永胜,张培因,王丽颖. 细胞与分子免疫学杂志. 2009(02)
[9]Asia Ⅰ口蹄疫vp2蛋白单克隆抗体的制备及单抗竞争ELISA方法的建立[J]. 向敏,张克山,卢顺,蔡利军,罗勇,张建民,何华,王勤刚,吴斌. 生物工程学报. 2008(09)
[10]亚洲1型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因在昆虫细胞中的共表达[J]. 信爱国,李华春,廖德芳,李乐,高林,杨永钦,张念祖,陈保善. 中国人兽共患病学报. 2008(06)
博士论文
[1]A、O型口蹄疫双价疫苗研究[D]. 邵寒娟.厦门大学 2004
硕士论文
[1]AsiaⅠ型FMDV灭活疫苗毒株不同宿主系传代中VP1基因的遗传变异研究[D]. 朱晶晶.新疆农业大学 2008
[2]AsiaⅠ型口蹄疫双效表达载体构建及表达[D]. 韩晓荣.甘肃农业大学 2008
[3]嗜酸乳杆菌发酵豆乳工艺及其凝胶特性的研究[D]. 姜涛.浙江工商大学 2008
本文编号：3201899
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
1.1 S-层蛋白概述
1.1.1 乳酸杆菌S-层蛋白
1.1.2 关于S-层蛋白的应用
1.2 关于口蹄疫的概述
1.2.1 口蹄疫病毒及其结构蛋白
1.2.2 VP1蛋白质的特征
1.2.3 VP1蛋白的抗原性
1.3 本研究的目的和意义
2 嗜酸乳杆菌MG株S-层蛋白的高级结构预测分析及原核表达
2.1 材料
2.1.1 质粒与菌种
2.1.2 工具酶及试剂
2.1.3 仪器与设备
2.1.4 引物设计
2.2 方法
2.2.1 嗜酸乳杆菌的s1p基因PCR扩增
2.2.2 嗜酸乳杆菌的s1p基因PCR扩增产物的纯化
2.2.3 嗜酸乳杆菌的s1p基因的连接与转化
2.2.4 SLP蛋白质的三级结构预测
2.2.5 原核表达载体pGEX-slp的构建
2.2.6 重组质粒表达条件的优化
2.2.7 SDS-PAGE电泳
2.2.8 Western blotting检测
2.3 结果
2.3.1 s助基因的PCR扩增产物
2.3.2 pMD-s1p双酶切鉴定
2.3.3 嗜酸乳杆菌SLP蛋白质的氨基酸序列的预测
2.3.4 SLP蛋白质的高级结构预测
2.3.5 重组载体pGEX-slp的酶切鉴定和PCR鉴定
2.3.6 s助基因原核表达条件的优化
2.3.7 SDS-PAGE与Western blotting分析结果
2.4 讨论
3 多型口蹄疫病毒VP1基因表位嵌入型S-层蛋白原核表达载体的构建
3.1 材料
3.1.1 重组质粒与VP1基因来源
3.1.2 工具酶和试剂
3.1.3 仪器与设备
3.2 方法
3.2.1 3型口蹄疫病毒的VP1的核苷酸序列分析
3.2.2 3型口蹄疫病毒的VP1的氨基酸序列分析
3.2.3 3型口蹄疫病毒的VP1的表面特性分析
3.2.4 重组表达载体的构建
3.2.5 重组表达质粒的诱导表达
3.2.6 表达产物的鉴定
3.3 结果
3.3.1 3型口蹄疫病毒的VP1的核酸分析
3.3.2 3型口蹄疫病毒的VP1的氨基酸分析
3.3.3 3型口蹄疫病毒的VP1的表面特性分析
3.3.4 重组质粒pGEX-s1p-MultiVP1的双酶切鉴定
3.3.5 SDS-PAGE电泳
3.3.6 Western blotting检测
3.4 讨论
4 结论
致谢
参考文献
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]负载重组口蹄疫病毒VP4蛋白的树突状细胞启动的T细胞应答[J]. 安鹏丽,李娜,李丽敏,张丽,张雷,高云欢,王家鑫. 畜牧兽医学报. 2012(10)
[2]A型口蹄疫病毒VP3基因的克隆及原核表达[J]. 刘航,杨晓燕,刘明,赵海波,郭华花,田永强. 江苏农业科学. 2012(06)
[3]乳酸杆菌S-层蛋白对鼠伤寒沙门氏菌黏附及入侵Caco-2细胞的拮抗作用[J]. 李鹏成,叶小兰,王志胜,庾庆华,杨倩. 微生物学报. 2010(09)
[4]几种乳酸菌S-层蛋白的普查以及slp基因的克隆与序列分析[J]. 双杰,包秋华,永胜,王艳霞,张和平,格日勒图. 中国乳品工业. 2010(08)
[5]Asia 1型口蹄疫病毒VP1基因的表达鉴定及其多抗制备[J]. 朱远茂,任宪刚,史鸿飞,高欲燃,于作,冯军科,相文华,薛飞. 中国预防兽医学报. 2010(04)
[6]口蹄疫新型疫苗研究进展[J]. 曹轶梅,卢曾军,田飞鹏,刘在新. 微生物学通报. 2009(11)
[7]含RGD受体结合位点口蹄疫病毒Asia1/JS/China/2005株的拯救及初步鉴定[J]. 李平花,白兴文,曹伟军,卢曾军,孙普,殷宏,刘在新. 微生物学报. 2009(07)
[8]一种重组口蹄疫疫苗的原核表达、纯化及其活性检测[J]. 董博翰,王华,胡小平,房明丽,张永胜,张培因,王丽颖. 细胞与分子免疫学杂志. 2009(02)
[9]Asia Ⅰ口蹄疫vp2蛋白单克隆抗体的制备及单抗竞争ELISA方法的建立[J]. 向敏,张克山,卢顺,蔡利军,罗勇,张建民,何华,王勤刚,吴斌. 生物工程学报. 2008(09)
[10]亚洲1型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因在昆虫细胞中的共表达[J]. 信爱国,李华春,廖德芳,李乐,高林,杨永钦,张念祖,陈保善. 中国人兽共患病学报. 2008(06)
博士论文
[1]A、O型口蹄疫双价疫苗研究[D]. 邵寒娟.厦门大学 2004
硕士论文
[1]AsiaⅠ型FMDV灭活疫苗毒株不同宿主系传代中VP1基因的遗传变异研究[D]. 朱晶晶.新疆农业大学 2008
[2]AsiaⅠ型口蹄疫双效表达载体构建及表达[D]. 韩晓荣.甘肃农业大学 2008
[3]嗜酸乳杆菌发酵豆乳工艺及其凝胶特性的研究[D]. 姜涛.浙江工商大学 2008
本文编号：3201899
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