生长抑素和木聚糖酶的融合表达及重组蛋白的性质研究

发布时间：2021-05-23 03:19

　　生长抑素（Somatostatin,SS）抑制生长激素释放和胃的蠕动、胃酸分泌、营养物质的吸收,阻碍饲料转化和动物生长;在生产实践中,如果使用SS主动免疫动物产生针对SS的特异抗体和它中和,可避免SS发挥负面作用。常用免疫方法包括注射、口服和喷雾等多种方式,其中口服免疫应用方便,可直接将疫苗投放于饲料中使用。但既往对使用SS免疫动物提高生产性能的研究多以DNA疫苗为载体,极少见到重组功能性SS蛋白的高效制备方法。饲用酶是常见的饲料添加剂,动物经口摄入饲用酶在胃肠道中发挥降解底物、促生长和调节肠道菌群等功效,因此饲用酶作为功能小肽（例如SS）的融合表达载体具有天然优越性;其中木聚糖酶在猪、鸡甚至反刍动物的饲料中均有成功应用实例,它的应用能降低食糜粘度、提高饲料转化率。和另一种常用的饲料酶制剂纤维素酶不同,目前使用的木聚糖酶常常是单一酶类;而且我国使用毕赤酵母发酵制备重组木聚糖酶技术已经非常成熟。因此,理论上可以将木聚糖酶和SS进行融合表达以高效制备SS重组蛋白并口服免疫。本研究尝试将三个不同微生物来源的木聚糖酶Np Xyl74（来自Neocallimastix patriciarum）、... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 绪论
    1.1 生长抑素的研究进展
        1.1.1 生长抑素的发现
        1.1.2 SS的种类
        1.1.3 生长抑素的分布
        1.1.4 SS-14的结构
        1.1.5 SS的作用
        1.1.6 SS的生理功能
        1.1.7 动物SS的人工干预调控研究
        1.1.8 生长抑素免疫的研究进展
    1.2 动物的免疫系统
    1.3 木聚糖酶研究进展
        1.3.1 木聚糖酶的分类
        1.3.2 木聚糖酶的催化机制
        1.3.3 木聚糖酶的表达
        1.3.4 木聚糖酶在饲料中作用机理
    1.4 本研究的目的与意义
第二章 生长抑素和木聚糖酶的融合表达
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株和质粒
        2.1.2 实验仪器、工具酶、试剂盒及其它生化试剂
        2.1.3 培养基及试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 木聚糖酶-SS质粒的构建
        2.2.2 木聚糖酶和木聚糖酶-SS基因在毕赤酵母中的表达
        2.2.3 酶学性质测定
    2.3 实验结果
        2.3.1 融合木聚糖酶-SS基因的克隆及表达载体的构建
        2.3.2 SS融合基因转化子木聚糖酶酶活测定
        2.3.3 蛋白含量标准曲线的绘制及蛋白浓度测定
        2.3.4 木聚糖酶和木聚糖酶-SS酶学测定
    2.4 讨论
    2.5 本章小结
第三章 融合表达的生长抑素抗原性和免疫原性研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验菌株与动物
        3.1.2 培养基、实验试剂和实验材料
    3.2 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 摇瓶水平的发酵培养及纯化
        3.3.2 Western blot
        3.3.3 木聚糖酶-SS融合蛋白免疫小鼠
        3.3.4 ELISA检测抗体效价
        3.3.5 收集小鼠血清
        3.3.6 斑点杂交(Dot-blot)
        3.3.7 小鼠的口服免疫
    3.4 实验结果
        3.4.1 木聚糖酶-SS融合蛋白抗原性分析
        3.4.2 木聚糖酶-SS融合蛋白免疫原性分析
        3.4.3 小鼠口服免疫木聚糖酶-SS融合蛋白增重分析
    3.5 讨论
    3.6 本章小结
第四章 木聚糖酶-生长抑素融合蛋白高效发酵表达
    4.1 实验材料
        4.1.1 菌株
        4.1.2 实验仪器、生化试剂
        4.1.3 培养基及溶剂配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 毕赤酵母上罐发酵表达
        4.2.2 酶活及蛋白浓度测定
    4.3 实验结果
        4.3.1 毕赤酵母上罐发酵表达Np Xyl74-SS
        4.3.2 毕赤酵母上罐发酵表达Cb Xyn10C-SS
        4.3.3 毕赤酵母上罐发酵表达Bs Xyl11A-SS
    4.4 讨论
    4.5 本章小结
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]生长抑素和耐热木聚糖酶的融合表达及性质研究[J]. 黄坤龙,苏小运,姚斌.  生物技术通报. 2020(09)
[2]木聚糖酶改善家禽的肠道健康[J]. 王晶晶,唐彩琰,James Tyus,Basheer Nusairat.  国外畜牧学(猪与禽). 2019(12)
[3]生长抑素抗独特型卵黄抗体的制备与鉴定[J]. 黄新喜,吕葆真,李丹,赵锋,欧阳森,黄晓文.  细胞与分子免疫学杂志. 2019(08)
[4]木聚糖酶和葡聚糖酶对肉鸡生长性能、屠宰性能、胴体成分及血液指标的影响[J]. 乔淑文,王芳,郝宏儒.  中国饲料. 2019(04)
[5]生长抑素基因疫苗pVAX1-TRX-SS对妊娠母猪及其后代的影响[J]. 黄志鹏,何家建,陈婷,孙加节,习欠云,史合群,张永亮.  中国兽医学报. 2019(01)
[6]木聚糖酶在猪小麦型日粮中的应用进展[J]. 华洪葳,邹世杰,许啸.  饲料研究. 2018(06)
[7]耐热耐碱木聚糖酶在大肠杆菌中的高效分泌表达及酶学性质研究[J]. 郝荣华,张晓元,王羽,刘飞,陈勉,朱希强,凌沛学.  食品与药品. 2018(03)
[8]巯乙胺在山羊羔羊育肥生产的应用研究与示范[J]. 冯刚,蒋光镔,韦敏,宋天真,张广权,朱林,蒲智敏,陈义,陈朝洪,肖洪波.  中国畜牧兽医文摘. 2018(02)
[9]木聚糖酶在饲料中的应用[J]. 梁忠原.  养殖与饲料. 2017(05)
[10]产木聚糖酶毕赤酵母工程菌株构建及表达条件优化研究[J]. 周晨妍,刘振华,王丹丹,李同彪,高启禹.  食品工业科技. 2016(13)



本文编号：3202186