犬巴贝斯虫套式PCR检测方法的建立与应用

发布时间：2021-05-26 17:23

　　巴贝斯虫是一类蜱传性寄生于红细胞内的血液原虫，能对各种家畜和人造成严重危害。临床上表现出贫血、发热、黄疸、血红蛋白尿等。随着生物技术的发展，目前已经建立了多种用于检测巴贝斯虫的方法，然而各种方法各有利弊，需要更敏感、快速、简单的诊断方法。为此，本研究建立了套式PCR检测方法，并利用该方法对豫西地区宠物犬只血液样品的血液原虫进行鉴定和流行病学调查。⑴犬的巴贝斯虫套式PCR检测方法的建立。本研究根据GenBank中收录的犬的巴贝斯虫18S rRNA基因序列，设计合成三组6对特异性诊断引物，利用实验室中原有阳性标准品选出最优组引物并建立套式PCR诊断方法。⑵利用套式PCR方法，对豫西地区（洛阳、平顶山、三门峡）各个县市共20个动物医院，15个大中型犬场（大于等于30只）的宠物犬进行调查，共采集犬血样2960份，捕捉媒介蜱虫813只。采用常规染色法、常规PCR法、套式PCR法进行检测，并计算犬的巴贝斯虫感染率。运用SZM系列体视显微镜进行形态学进行蜱虫观察，以鉴定传播犬巴贝斯虫病的媒介中蜱虫的种类。⑶将随机抽取的25份阳性样品送至华大基因科技服务有限公司进行测序，测序结果先用NCBI中的BLA... 

【文章来源】：河南科技大学河南省

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 文献综述
    1.1 巴贝斯虫的病理学影响及分布情况
    1.2 犬巴贝斯虫病概述
        1.2.1 传染源
        1.2.2 传播途径
        1.2.3 易感动物
    1.3 实验室诊断
        1.3.1 病原学检查
        1.3.2 免疫学诊断
        1.3.3 分子生物学诊断
第2章 犬巴贝斯虫套式 PCR 检测方法的建立
    2.1 目的与意义
    2.2 材料与方法
        2.2.1 主要试剂和器材
        2.2.2 犬血液的采集及全血基因组 DNA 的抽提
        2.2.3 设计合成引物
        2.2.4 PCR 产物凝胶电泳成像观察
        2.2.5 巴贝斯虫 18sRNA 基因的扩增
        2.2.6 PCR 产物的克隆、浓度及序列测定
        2.2.7 套式 PCR 灵敏度测定
        2.2.8 套式 PCR 特异性的测定
        2.2.9 病原株和巴贝斯虫及泰勒虫系统进化分析
    2.3 结果
        2.3.1 三组引物分别扩增实验
        2.3.2 套式 PCR 扩增实验
        2.3.3 PCR 产物浓度测定
        2.3.4 套式 PCR 特异性实验
        2.3.5 套式 PCR 灵敏度实验
        2.3.6 序列测定同源性比较
        2.3.7 18s RNA 进化树的分析
    2.4 讨论
        2.4.1 套式 PCR 检测方法的建立
        2.4.2 18S rRNA 各分离株进化树分析
    2.5 小结
第3章 豫西地区犬巴贝斯虫病及媒介调查
    3.1 材料与方法
        3.1.1 样品来源及犬巴贝斯虫病的判定标准
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 犬血涂片的染色镜检
        3.1.4 犬巴贝斯虫的套式 PCR 检测
        3.1.5 犬巴贝斯虫病的判定标准
        3.1.6 犬体表蜱虫的初步调查
        3.1.7 统计分析
    3.2 结果
        3.2.1 犬巴贝斯虫病临床检查
        3.2.2 犬血液涂片染色镜检
        3.2.3 犬血液基因组 DNA 的套式 PCR 检测
        3.2.4 犬巴贝斯虫病在全年调查中感染情况
        3.2.5 蜱虫形态观察及带虫率
    3.3 讨论
        3.3.1 犬巴贝斯虫病临床症状
        3.3.2 犬巴贝斯虫病在豫西地区的流行情况
        3.3.3 豫西地区犬生活场地蜱虫类型和带虫率的情况
        3.3.4 犬巴贝斯虫病发病因素分析
    3.4 小结
第4章 犬巴贝斯虫病的诊疗体会
    4.1 犬巴贝斯虫病的治疗
    4.2 疑似病例的鉴别性诊断
    4.3 防制措施
第5章 结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]我国南方地区羊泰勒虫病的流行病学调查[J]. 袁延庆,李有全,刘志杰,杨吉飞,陈泽,关贵全,罗建勋,殷宏.  中国兽医科学. 2013(06)
[2]犬巴贝斯虫病的诊断与治疗[J]. 邱珺.  畜牧与饲料科学. 2012(10)
[3]上海市犬体表媒介蜱寄生情况初步调查[J]. 刘琴,危芙蓉,朱丹,兰勤娴,施文琦,张仪.  中国血吸虫病防治杂志. 2012(05)
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[7]犬巴贝斯虫病检测研究[J]. 武浩,张煜波,王光亚.  中国畜牧兽医. 2012(04)
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博士论文
[1]东方巴贝斯虫cDNA文库构建及其应用[D]. 刘琴.华中农业大学 2007

硕士论文
[1]河南省新型农村社区规划建设研究[D]. 贾建坡.郑州大学 2012
[2]牛羊梨形虫PCR-RFLP分类方法的建立及部分标志基因的克隆与测序[D]. 徐宗可.中国农业科学院 2011
[3]牛双芽巴贝斯虫HSP20基因的克隆表达及其重组蛋白的免疫反应性研究[D]. 孙其喆.新疆农业大学 2009
[4]牛巴贝斯虫流行病学初步调查及体外培养研究[D]. 吕伟.新疆农业大学 2009



本文编号：3206757