金黄色葡萄球菌噬菌体的分离鉴定及对治疗乳腺炎的初步应用

发布时间：2021-05-27 10:08

　　金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为葡萄球菌属的革兰阳性球菌,可引起食物中毒、心内膜炎、葡萄球菌烫伤皮肤综合征和中毒性休克综合征,是一种常见的人兽共患病病原。目前治疗金黄色葡萄球菌主要是使用抗生素,而抗生素的滥用导致金黄色葡萄球菌耐药菌株愈来愈多,给临床治疗带来困难。本研究通过噬菌体富集法从猪粪中分离出5株金黄色葡萄球菌烈性噬菌体,分别命名为4086-1、4086-2、4086-3、4086-4和4086-6。通过电镜观察,5株噬菌体均具有典型的二十面体头部和不能收缩的短尾部,属于尾噬菌体目、短尾噬菌体科。通过对噬菌体基因组进行限制性内切酶（Eco R Ⅰ、Hpa Ⅰ、Rsr Ⅱ、Sac Ⅰ、Sph Ⅰ、Bgl Ⅱ、SMa Ⅱ、Sac Ⅱ、Sna B Ⅰ、Avr Ⅱ、Pst Ⅰ）分析,结果表明噬菌体4086-1、4086-2、4086-3、4086-4和4086-6是5株不同的噬菌体。宿主范围测定结果显示,4086-1、4086-2、4086-3可感染金黄色葡萄球菌S.aureus CVCC546、S.aureus 4086、S.aureus Ben和S.au... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 金黄色葡萄球菌研究进展
        1.1.1 金黄色葡萄球菌生物学特性及流行性危害
        1.1.2 金黄色葡萄球菌的生物膜形成过程及调控机制
        1.1.3 金黄色葡萄球菌耐药性及耐药机制
    1.2 噬菌体研究进展
        1.2.1 噬菌体的概述
        1.2.2 噬菌体的分类及应用
        1.2.3 噬菌体的应用
        1.2.4 噬菌体在控制细菌生物膜方面的应用
    1.3 研究目的与意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 样品和菌株
        2.1.2 主要试剂和设备
        2.1.3 培养基配制
        2.1.4 主要溶液配制
        2.1.5 实验动物
    2.2 试验方法
        2.2.1 金黄色葡萄球菌的鉴定
        2.2.2 金黄色葡萄球菌噬菌体的分离
        2.2.3 噬菌体生物学特性的鉴定
        2.2.4 噬菌体基因组结构分析
        2.2.5 理化因素对噬菌体活性的影响
        2.2.6 噬菌体对不同细菌吸附率的检测
        2.2.7 噬菌体感染后对细菌生长繁殖的影响
        2.2.8 噬菌体对金黄色葡萄球菌生物膜的影响
        2.2.9 乳腺炎模型的建立
        2.2.10 噬菌体对小鼠乳腺炎的治疗
3 结果
    3.1 金黄色葡萄球菌的鉴定结果
        3.1.1 nuc和 mecA基因的扩增及鉴定
        3.1.2 耐药性的测定结果
    3.2 金葡菌噬菌体的分离及其生物学特性鉴定结果
        3.2.1 噬菌斑的观察结果
        3.2.2 噬菌体的电镜观察结果
        3.2.3 宿主范围的测定结果
        3.2.4 最佳感染复数的测定结果
        3.2.5 一步生长曲线测定结果
    3.3 噬菌体基因组结构的鉴定结果
        3.3.1 基因组性质的鉴定结果
        3.3.2 基因组酶切鉴定结果
    3.4 理化因素对噬菌体活性的影响结果
        3.4.1 温度对噬菌体活性的影响结果
        3.4.2 pH对噬菌体活性的影响结果
        3.4.3 有机试剂对噬菌体活性的影响结果
        3.4.4 去污剂对噬菌体活性的影响结果
        3.4.5 渗透压对噬菌体活性的影响结果
        3.4.6 钙镁离子对噬菌体活性的影响结果
    3.5 噬菌体对不同细菌吸附率的测定结果
    3.6 噬菌体感染后对细菌生长繁殖的影响结果
    3.7 噬菌体对金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响结果
        3.7.1 pH对生物膜形成的影响结果
        3.7.2 不同培养时间对生物膜形成的影响结果
        3.7.3 噬菌体清除生物膜能力的检测结果
    3.8 小鼠金葡菌乳腺炎模型的建立
        3.8.1 临床表征变化
        3.8.2 乳腺组织中细菌数的测定结果
        3.8.3 乳腺病理组织学变化
        3.8.4 乳腺组织内细胞因子TNF-α含量变化
    3.9 噬菌体对小鼠乳腺炎治疗结果
        3.9.1 噬菌体对小鼠的毒性检测
        3.9.2 乳腺组织中细菌数的测定结果
        3.9.3 乳腺组织病理学观察结果
        3.9.4 乳腺组织内细胞因子检测结果
4 讨论
    4.1 金葡菌噬菌体对理化因素耐受能力的分析及对生产实践的指导意义
    4.2 噬菌体对金黄色葡萄球菌生物膜的清除作用
    4.3 金葡菌噬菌体在治疗耐药菌感染方面的应用
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3207378