MUC13基因抗致病性大肠杆菌机理的研究
发布时间：2021-05-27 13:37
产肠毒素大肠杆菌F4ac型（Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC F4ac）是导致仔猪腹泻的主要病原菌之一,ETEC产生的肠毒素能引起仔猪腹泻。ETEC表面的F4菌毛蛋白能与仔猪小肠的受体蛋白结合协助肠毒素进入小肠上皮细胞并引起腹泻,如果小肠能够编码受体蛋白则仔猪表现为腹泻,不表达菌毛蛋白的个体即使感染了ETEC也不会发生腹泻。因此,菌毛蛋白的受体基因决定仔猪对ETEC是否易感。猪13号染色体的MUC13基因被认为是控制仔猪ETECF4ac+易感或抗性的候选基因。本文主要针对ETEC F4ac+菌的受体基因MUC13内含子7以及全部外显子中的SNP位点进行检测,采用等位基因特异性PCR（Allele-specific PCR）方法对贵州地方猪种MUC13基因的多态性进行群体研究;通过定点突变,将两种基因型的编码区连接到酿酒酵母表达载体pYES3-CT上,构建重组质粒pYES3-MUC13并进行诱导表达两种目的蛋白。用流式细胞术检测两种目的蛋白与ETEC F4ac+菌的结合能力,获得了...
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略词表
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1 研究背景
2 大肠杆菌的致病机制
3 F4ac型产肠毒素大肠杆菌
3.1 F4ac型产肠毒素大肠杆菌
3.2 肠毒素
4 产肠毒素大肠杆菌(ETEC)受体基因的研究进展
4.1 产肠毒素大肠杆菌受体基因的定位研究
4.2 菌毛蛋白F4受体基因的研究进展
5 SNP检测方法
6 定点突变技术
7 酿酒酵母表达系统
8 研究目的及意义
第二章 材料与方法
1 实验材料与仪器试剂
1.1 实验材料
1.2 实验仪器
1.3 实验试剂
1.4 试剂的配制
2 实验方法
2.1 基因组DNA的提取与检测
2.2 MUC13基因内含子7的AS-PCR检测
2.3 目的DNA片段的克隆转化
2.4 MUC13基因所有外显子SNP位点的检测
2.5 黏附实验
2.6 小肠组织RNA的提取及检测
2.7 猪小肠cDNA的合成及MUC13基因mRNA的扩增
2.8 ETECF4ac受体基因MUC13外显子6变异位点定点突变
2.9 ETECF4ac受体基因MUC13表达载体的构建
3 重组质粒pYES3-CT-MUC13的诱导表达
3.1 重组蛋白MUC13-Thr/MUC13-Ser的提取及检测
3.2 流式细胞术检测重组蛋白MUC13-Thr/MUC13-Ser与ETEC F4ac的结合
第三章 结果与分析
1 基因组DNA的提取
2 ETECF4ac受体基因MUC13位点基因型分析
2.1 ETECF4ac受体基因MUC13内含子7候选SNP位点检测
2.2 ETECF4ac受体基因MUC13外显子SNP位点分析
2.3 ETECF4ac受体基因MUC13两个SNP位点相关特异性分析
3 黏附实验
4 重组质粒PYES3-CT-MUC13表达载体构建及表达
4.1 大白猪小肠及MUC13基因编码区的扩增
4.2 ETECF4ac受体MUC13基因外显子6定点突变
4.3 ETECF4ac受体MUC13基因酵母表达载体构建
4.4 重组质粒pYES3-CT-MUC13的诱导表达及检测
4.5 MUC13-Thr/MUC13-Ser蛋白分析
5 流式细胞术检测MUC13-Thr/MUC13-Ser蛋白与ETECF4ac菌的结合
第四章 讨论
1 产肠毒素大肠杆菌F4ac与仔猪腹泻
2 ETECF4ac受体基因MUC13的内含子与外显子遗传特异性分析
3 酿酒酵母的表达分析
4 ETECF4ac受体基因MUC13编码蛋白对猪抗腹泻性状影响分析
第五章 结论
参考文献
致谢
附录
论文资助
在校期间已发表的文章
在校期间获得的奖励
【参考文献】：
期刊论文
[1]一种二倍体片段测序中SNP检测系统的构建[J]. 邓继忠,林伟森,甘四明,黄华盛,李梅,金济,何明昊. 华南农业大学学报. 2016(03)
[2]小麦TaGAPC定点突变体基因载体构建及其原核表达[J]. 郭子平,翟清华,曾令锋,邓西平,杨淑慎. 华北农学报. 2016(01)
[3]苏淮猪群体抗腹泻基因MUC13和FUT1多态性分析及其抗腹泻选育方案研究[J]. 方宇瑜,吴艳,高硕,李强,李会智,付玲玲,任二都,李平华,黄瑞华. 畜牧与兽医. 2015(12)
[4]MUC13、FUT1基因在2个种猪核心群中的分子标记辅助选择研究[J]. 杨明,王青来,刘敬顺,刘珍云,温淑贤,吴珍芳,罗旭芳. 华南农业大学学报. 2015(06)
[5]不同禽源致病性大肠杆菌毒力基因分布规律研究[J]. 胡会杰,张琪,周明旭,朱国强. 中国家禽. 2015(10)
[6]MUC13基因第2内含子插入/缺失突变对基因表达和经济性状的影响[J]. 孙丽,朱世平,夏日炜,黄小国,吴圣龙,包文斌. 中国畜牧杂志. 2015(09)
[7]SNP检测方法的研究进展[J]. 许家磊,王宇,后猛,李强. 分子植物育种. 2015(02)
[8]MUC13的研究进展[J]. 黄礼燕,张声. 临床与病理杂志. 2014(03)
[9]ChIFN-α酿酒酵母工程菌的发酵条件优化[J]. 秦捷敏,宋莉,卢凌霄,赵德刚. 山地农业生物学报. 2014(02)
[10]抗仔猪断奶前腹泻猪专门化新品系的培育[J]. 唐建红,邓政,林峰,任军,肖石军,王闯,李锦炎,侯利娟,黄弋轩,刘先先,熊信威,黄路生,丁能水. 猪业科学. 2013(10)
博士论文
[1]仔猪产肠毒素大肠杆菌（ETEC）F4ac受体基因的鉴定及功能验证[D]. 王文文.中国农业大学 2016
[2]大肠杆菌Ⅰ型群体感应功能研究[D]. 羊扬.扬州大学 2014
[3]猪源肠毒素大肠杆菌K88ac和F18ac菌毛蛋白基因的表达及其在卵黄抗体生产中的应用[D]. 王劼.华中农业大学 2007
硕士论文
[1]肠外致病性大肠杆菌icmF基因功能研究和侵入脑微血管内皮细胞相关基因的筛选[D]. 张滔.华中农业大学 2016
[2]人参皂苷Rh2酵母工程菌的构建[D]. 许田慧.吉林大学 2016
[3]ETEC F4ac易感和抗性猪只小肠差异蛋白的鉴别[D]. 陈一杰.江西农业大学 2011
本文编号：3207668
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
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缩略词表
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1 研究背景
2 大肠杆菌的致病机制
3 F4ac型产肠毒素大肠杆菌
3.1 F4ac型产肠毒素大肠杆菌
3.2 肠毒素
4 产肠毒素大肠杆菌(ETEC)受体基因的研究进展
4.1 产肠毒素大肠杆菌受体基因的定位研究
4.2 菌毛蛋白F4受体基因的研究进展
5 SNP检测方法
6 定点突变技术
7 酿酒酵母表达系统
8 研究目的及意义
第二章 材料与方法
1 实验材料与仪器试剂
1.1 实验材料
1.2 实验仪器
1.3 实验试剂
1.4 试剂的配制
2 实验方法
2.1 基因组DNA的提取与检测
2.2 MUC13基因内含子7的AS-PCR检测
2.3 目的DNA片段的克隆转化
2.4 MUC13基因所有外显子SNP位点的检测
2.5 黏附实验
2.6 小肠组织RNA的提取及检测
2.7 猪小肠cDNA的合成及MUC13基因mRNA的扩增
2.8 ETECF4ac受体基因MUC13外显子6变异位点定点突变
2.9 ETECF4ac受体基因MUC13表达载体的构建
3 重组质粒pYES3-CT-MUC13的诱导表达
3.1 重组蛋白MUC13-Thr/MUC13-Ser的提取及检测
3.2 流式细胞术检测重组蛋白MUC13-Thr/MUC13-Ser与ETEC F4ac的结合
第三章 结果与分析
1 基因组DNA的提取
2 ETECF4ac受体基因MUC13位点基因型分析
2.1 ETECF4ac受体基因MUC13内含子7候选SNP位点检测
2.2 ETECF4ac受体基因MUC13外显子SNP位点分析
2.3 ETECF4ac受体基因MUC13两个SNP位点相关特异性分析
3 黏附实验
4 重组质粒PYES3-CT-MUC13表达载体构建及表达
4.1 大白猪小肠及MUC13基因编码区的扩增
4.2 ETECF4ac受体MUC13基因外显子6定点突变
4.3 ETECF4ac受体MUC13基因酵母表达载体构建
4.4 重组质粒pYES3-CT-MUC13的诱导表达及检测
4.5 MUC13-Thr/MUC13-Ser蛋白分析
5 流式细胞术检测MUC13-Thr/MUC13-Ser蛋白与ETECF4ac菌的结合
第四章 讨论
1 产肠毒素大肠杆菌F4ac与仔猪腹泻
2 ETECF4ac受体基因MUC13的内含子与外显子遗传特异性分析
3 酿酒酵母的表达分析
4 ETECF4ac受体基因MUC13编码蛋白对猪抗腹泻性状影响分析
第五章 结论
参考文献
致谢
附录
论文资助
在校期间已发表的文章
在校期间获得的奖励
【参考文献】：
期刊论文
[1]一种二倍体片段测序中SNP检测系统的构建[J]. 邓继忠,林伟森,甘四明,黄华盛,李梅,金济,何明昊. 华南农业大学学报. 2016(03)
[2]小麦TaGAPC定点突变体基因载体构建及其原核表达[J]. 郭子平,翟清华,曾令锋,邓西平,杨淑慎. 华北农学报. 2016(01)
[3]苏淮猪群体抗腹泻基因MUC13和FUT1多态性分析及其抗腹泻选育方案研究[J]. 方宇瑜,吴艳,高硕,李强,李会智,付玲玲,任二都,李平华,黄瑞华. 畜牧与兽医. 2015(12)
[4]MUC13、FUT1基因在2个种猪核心群中的分子标记辅助选择研究[J]. 杨明,王青来,刘敬顺,刘珍云,温淑贤,吴珍芳,罗旭芳. 华南农业大学学报. 2015(06)
[5]不同禽源致病性大肠杆菌毒力基因分布规律研究[J]. 胡会杰,张琪,周明旭,朱国强. 中国家禽. 2015(10)
[6]MUC13基因第2内含子插入/缺失突变对基因表达和经济性状的影响[J]. 孙丽,朱世平,夏日炜,黄小国,吴圣龙,包文斌. 中国畜牧杂志. 2015(09)
[7]SNP检测方法的研究进展[J]. 许家磊,王宇,后猛,李强. 分子植物育种. 2015(02)
[8]MUC13的研究进展[J]. 黄礼燕,张声. 临床与病理杂志. 2014(03)
[9]ChIFN-α酿酒酵母工程菌的发酵条件优化[J]. 秦捷敏,宋莉,卢凌霄,赵德刚. 山地农业生物学报. 2014(02)
[10]抗仔猪断奶前腹泻猪专门化新品系的培育[J]. 唐建红,邓政,林峰,任军,肖石军,王闯,李锦炎,侯利娟,黄弋轩,刘先先,熊信威,黄路生,丁能水. 猪业科学. 2013(10)
博士论文
[1]仔猪产肠毒素大肠杆菌（ETEC）F4ac受体基因的鉴定及功能验证[D]. 王文文.中国农业大学 2016
[2]大肠杆菌Ⅰ型群体感应功能研究[D]. 羊扬.扬州大学 2014
[3]猪源肠毒素大肠杆菌K88ac和F18ac菌毛蛋白基因的表达及其在卵黄抗体生产中的应用[D]. 王劼.华中农业大学 2007
硕士论文
[1]肠外致病性大肠杆菌icmF基因功能研究和侵入脑微血管内皮细胞相关基因的筛选[D]. 张滔.华中农业大学 2016
[2]人参皂苷Rh2酵母工程菌的构建[D]. 许田慧.吉林大学 2016
[3]ETEC F4ac易感和抗性猪只小肠差异蛋白的鉴别[D]. 陈一杰.江西农业大学 2011
本文编号：3207668
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