NOD1/2-RIP2信号通路参与副猪嗜血杆菌感染PK-15细胞调控机制的研究

发布时间：2021-05-28 09:27

　　副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）引起的以纤维素性浆膜炎、多发性关节炎、胸膜炎和脑膜炎为特征的一种细菌性传染病,给全球养猪业造成了巨大经济损失。HPS感染猪后会引起全身性炎症和败血症,但其致病机理并不是很清楚。NOD1/2受体在识别病原微生物中发挥着重要的作用。NOD1/2通过接头分子RIP2,激活下游的NF-κB和/或MAPKs信号通路,调控炎症反应的发生。本课题组之前的研究已证明HPS感染PK-15细胞可以激活TLRs介导的NF-κB和MAPKs（P38/JNK）信号通路并调控炎症因子的分泌。在本研究中,我们进一步探讨胞质内的模式识别受体NOD1/2在HPS感染PK-15细胞引起炎症反应中的作用,并探索NOD1/2-RIP2信号通路与NF-κB和MAPKs的激活及其下游炎症因子的关系。具体内容如下:1.HPS感染PK-15细胞上调NOD2蛋白表达和RIP2磷酸化水平通过Western Blot方法检测HPS感染PK-15细胞后NOD1和NOD2的变化,结果发现,HPS感染PK-15细胞后能够显著上调NOD2的表达,并呈感染时间和剂量依... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
1 文献综述
    1.1 副猪嗜血杆菌病
    1.2 NOD信号通路
        1.2.1 NLRs结构
        1.2.2 NOD1/2-RIP2信号通路
        1.2.3 NOD1/2 与疾病
    1.3 副猪嗜血杆菌（HPS）感染与炎症反应
        1.3.1 HPS感染PK-15细胞激活NF-κB和MAPKs（p38/JNK)信号通路
        1.3.2 HPS感染产生趋化因子
2 研究目的和意义
3 材料与方法
    3.1 试验材料
        3.1.1 细胞、菌株、质粒和序列
        3.1.2 主要药品与试剂盒
        3.1.3 主要培养基及其配制
        3.1.4 主要溶液的配制
        3.1.5 主要实验器材
    3.2 试验方法
        3.2.1 细菌培养
        3.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备（氯化钙法）
        3.2.3 质粒的制备与鉴定
        3.2.4 细胞的转染实验
        3.2.5 Western Blot检测细胞中目的蛋白的表达
        3.2.6 细胞、感染细菌的细胞样品总RNA的提取
        3.2.7 c DNA的合成
        3.2.8 SYBR Green I实时定量PCR
        3.2.9 相对m RNA表达水平的计算
        3.2.10 双荧光素酶检测实验
        3.2.11 统计学分析
4 结果与分析
    4.1 HPS感染PK-15细胞后NOD1/2 蛋白表达和RIP2磷酸化水平分析
        4.1.1 HPS感染PK-15细胞后NOD1/2 蛋白表达的动力学分析
        4.1.2 HPS感染PK-15细胞后RIP2蛋白表达及其磷酸化水平分析
    4.2 NOD1/2-RIP2与HPS感染PK-15细胞激活NF-ΚB和MAPKS信号通路的分析
        4.2.1 NOD1、NOD2和RIP2干扰分子的干扰效率检测
        4.2.2 NOD1/2、RIP2基因干扰对HPS感染PK-15细胞后NF-κB启动子活性的影响
        4.2.3 NOD1/2、RIP2基因干扰对HPS感染PK-15细胞后P65的磷酸化水平的影响
        4.2.4 NOD1/2、RIP2基因干扰对HPS感染PK-15细胞后MAPKs通路中P38、JNK和ERK磷酸化水平的影响
    4.3 NOD1/2、RIP2基因干扰对HPS感染PK-15细胞后CCL4、CCL5和IL-8表达的影响
5 讨论
    5.1 HPS感染PK-15细胞激活NOD1/2-RIP2信号通路分子机制的研究
    5.2 HPS感染PK-15细胞激活NOD1/2 表达的研究
    5.3 HPS感染PK-15细胞激活NOD1/2 信号通路和TLRS互联作用的研究
6 结论
参考文献
致谢



本文编号：3207997