猪嗜血支原体MSG1蛋白B细胞表位的解析及双抗体夹心ELISA方法的建立

发布时间：2021-05-31 13:38

　　猪嗜血支原体（Mycoplasmas suis/M.suis）又称猪附红细胞体（porcine eperythrozoon/PE）,是传染性贫血病（Infectious anemia）的病原体,危害全球养猪业。目前猪嗜血支原体被鉴定出至少有8种病原蛋白,其中MSG1蛋白黏附红细胞和糖酵解的功能,被认为是重要的病原蛋白。本研究成功制备5株抗MSG1蛋白的单克隆抗体,并鉴定获得的3个表位（251-255aa,268-274aa,291-299aa）.为猪嗜血支原体表位疫苗研究奠定重要基础。本研究同时还利用制备的单克隆抗体建立了MSG1蛋白双抗体夹心ELISA方法,有望为建立猪嗜血支原体的快速诊断方法奠定基础。研究内容主要分为以下3部分：1.猪嗜血支原体MSG1蛋白单克隆抗体的制备以实验室保存的含猪嗜血支原体msg1基因的重组质粒pBAD/His-msgl转化至宿主菌Top10中,并诱导表达获得重组MSG1蛋白。将纯化的重组蛋白MSG1与等量的弗氏佐剂混合乳化,皮下多点注射免疫BALB/c小鼠。取抗体检测阳性的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA方法筛选出5株能稳定分泌抗猪嗜血支原... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 文献综述
    第一章 猪嗜血支原体的研究进展
        1 猪嗜血支原体的病原学
            1.1 起源与分类地位
            1.2 分布与危害
            1.3 培养特性
        2 病原蛋白
            2.1 MSG1
            2.2 HspA1
            2.3 其他病原蛋白
        3 猪嗜血支原体病的检测方法
            3.1 形态学检测
            3.2 免疫学方法检测
            3.3 分子生物学检测
        参考文献
    第二章 单克隆抗体技术与抗原表位分析
        1 单克隆抗体技术和应用
            1.1 单克隆抗体技术历史与进展
            1.2 单克隆抗体技术
            1.3 单克隆抗体的应用
        2 抗原表位的研究方法
            2.1 表位的概念及研究意义
            2.2 表位预测方法
        参考文献
第二部分 实验研究
    第三章 猪嗜血支原体MSG1蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 细胞、菌株、实验动物
            1.2 主要试剂
            1.3 重组抗原蛋白的制备及纯化
        2 单克隆抗体的制备和鉴定
            2.1 动物免疫
            2.2 间接ELISA方法的建立
            2.3 单克隆抗体的制备
            2.4 单克隆抗体的鉴定
        3 结果
            3.1 抗原蛋白的制备和纯化
            3.2 单克隆抗体的鉴定
        4 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第四章 猪嗜血支原体MSG1蛋白B细胞表位的鉴定
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 毒株、质粒及其他材料
            1.2 MSG1蛋白基因分段克隆引物设计及合成
            1.3 基因扩增与重组表达载体的构建
            1.4 目的蛋白的表达及鉴定
            1.5 ELISA方法鉴定MSG1 B细胞表位
            1.6 Western blot鉴定MSG1 B细胞表位
        2 结果
            2.1 pET-32a-MSG1-F2—F24基因片段的扩增
            2.2 重组质粒pET-32a-MSG1-F2—F24的构建与鉴定
            2.3 重组蛋白的表达,纯化和抗原性鉴定
            2.4 ELISA方法鉴定MSG1 B细胞表位
            2.5 Western blot方法鉴定MSG1 B细胞表位
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第五章 猪嗜血支原体MSG1蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 试剂、菌株、细胞及血清
            1.2 抗原蛋白的制备
            1.3 双抗体夹心ELISA
            1.4 包被抗体的确定
            1.5 抗体的纯化
            1.6 双抗体夹心ELISA最佳反应条件的选择
            1.7 双抗体夹心ELISA的性能评价
        2 结果
            2.1 包被抗体的确定
            2.2 单克隆抗体的纯化
            2.3 双抗体夹心ELISA最佳反应条件的选择
            2.4 双抗体夹心ELISA的性能评价
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
全文总结
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]抗原表位鉴定方法的研究进展[J]. 文雪霞,陈化兰,熊永忠,王秀荣.  中国畜牧兽医. 2012(07)
[2]单克隆抗体在水产病原微生物检测中的应用[J]. 黄华,杜天舒,李强,王轶南,李华.  中国农业科技导报. 2012(02)
[3]猪嗜血支原体酶标单抗阻断ELISA检测方法的建立[J]. 张长莹,李玉峰,姜平.  畜牧兽医学报. 2011(11)
[4]抗猪（嗜血）支原体MSG1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 张长莹,李玉峰,曹彦琼,宋艳华,陈闻,姜平.  畜牧与兽医. 2011(10)
[5]单克隆抗体制备技术的最新进展及应用前景[J]. 孔君,刘箐,韩跃武,王天昌,刘金芝.  免疫学杂志. 2011(02)
[6]Flag标签抗原的偶联及其单克隆抗体的应用研究[J]. 王云龙,李忠信,李恒思,李玉林,王继美,刘旺根,李兆学.  动物医学进展. 2011(01)
[7]浅谈ELISA的影响因素[J]. 张玉霞,周杰钊.  中国民族民间医药. 2010(18)
[8]猪附红细胞体MSG1蛋白的表达和多克隆抗体的制备[J]. 缪芬芳,刘明亚,李玉峰,陈闻,许家荣,王先炜,姜平.  畜牧与兽医. 2010(05)
[9]猪附红细胞体双抗夹心ELISA检测方法的建立[J]. 朱凝瑜,袁聪俐,杨志彪,华修国.  上海交通大学学报(农业科学版). 2010(02)
[10]B细胞表位定位的研究进展[J]. 王洪林,陈明亮,刘文毅,杨帆,胡晓丰,杨斌,李晋涛.  生命科学. 2009(02)

博士论文
[1]猪嗜血支原体病原特性、流行特点及与宿主互作机制研究[D]. 袁聪俐.上海交通大学 2009

硕士论文
[1]猪附红细胞体双抗夹心ELISA检测方法及小鼠病理模型的建立[D]. 朱凝瑜.上海交通大学 2010
[2]乙脑病毒IgG抗体单克隆抗体捕获ELISA检测方法的建立[D]. 高晓艳.中国疾病预防控制中心 2008
[3]猪附红细胞体病临床调查与诊断分析[D]. 刘小燕.中国农业大学 2004



本文编号：3208365