瘤胃微生物脲酶抑制剂的筛选与效果评价

发布时间：2021-05-31 19:06

　　在反刍动物瘤胃中,细菌脲酶水解尿素生成氨的速率过快,无法与挥发性脂肪酸（碳架）的生成速度匹配,导致氨在瘤胃中不能及时被微生物利用而吸收入血,降低了反刍动物对尿素氮的利用率,严重时造成动物氨中毒,同时污染环境。因此,降低瘤胃细菌脲酶活性在反刍动物营养领域具有研究意义。本文利用同源建模获得高丰度瘤胃细菌脲酶的三维结构,通过基于分子对接的虚拟筛选技术,筛选化合物库并评价其抑制脲酶活性效果。利用酶动力学、瘤胃微生物厌氧培养及Caco-2细胞培养评价化合物的抑制类型、对微生物氮代谢的影响、稳定性及细胞毒性。通过分子对接研究化合物与脲酶的作用模式,通过化合物-靶标蛋白间的药效团模型解析化合物的有效化学基团。为获得瘤胃高丰度脲酶蛋白结构及其抑制剂,以实验室前期获得的瘤胃高丰度脲酶基因为靶标序列,以产气克雷伯氏菌脲酶蛋白为模板,利用SWISS-MODEL server对瘤胃高丰度脲酶蛋白进行同源建模,利用SAVES 5.0对瘤胃脲酶蛋白结构进行合理性评价。结果表明,靶标序列与产气克雷伯氏菌脲酶蛋白（PDB＿ID 4EP8）的氨基酸序列相似度为69.56%。以该蛋白为模板,生成瘤胃脲酶蛋白结构模型的GM... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

基于类黄酮结构的理想型氧肟酸d

活性脲酶（左图）、磷酰胺类化合物（Fig.1-2Schematicstructuresoftheactivesiteofnativ

中国农业科学院硕士学位论文第二章瘤胃脲酶蛋白三维结构的建模与虚拟筛选20表2-1（续）PDB编号PDB_ID脲酶来源Ureasesources分辨率（）Resolution（）结构位置Structurelocation相似度（%）Identity（%）1A5M产气克雷伯氏菌2C链69.261A5L产气克雷伯氏菌2.2C链69.261EJT产气克雷伯氏菌2C链69.141EJV产气克雷伯氏菌2.4C链69.141EJU产气克雷伯氏菌2C链69.141EJR产气克雷伯氏菌2C链69.141EJS产气克雷伯氏菌2C链69.144GY7刀豆脲酶1.492A链65.784H9M刀豆脲酶1.52A链65.781E9Z幽门螺旋杆菌3β亚基64.851E9Y幽门螺旋杆菌3β亚基64.67图2-1产气克雷伯氏菌脲酶蛋白结构1EJX（左图）和4EP8（右图）Fig.2-1Klebsiellaaerogenesureaseproteinstructure1EJX(left)and4EP8(right)图2-2瘤胃脲酶蛋白靶标氨基酸序列与产气克雷伯氏菌脲酶蛋白4EP8的序列比对图Fig.2-2SequencealignmentoftargetedrumenureaseaminoacidsequenceandKlebsiellaaerogenesureaseprotein4EP8

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3208802