鸭疫里默氏杆菌亚铁离子转运系统Feo的功能研究

发布时间：2021-06-06 14:13

　　鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestiferr,RA）是属于黄杆菌科的革兰氏阴性菌,是引起鸭和其它家禽传染性浆膜炎和败血症的病原菌。本次试验将研究Feo系统在鸭疫里默氏杆菌转运亚铁离子过程中的作用,以及缺失Feo系统对鸭疫里默氏杆菌定殖能力的影响。主要试验结果如下:1 RA ATCC 11845株feoA,feoB和feoAB基因缺失株及回补菌株的构建分别将feoA、feoB和feoAB基因的上下游约800 bp的同源臂及红霉素抗性基因片段用PCR扩增并融合,融合的基因片段通过自然转化的方法导入RAATCC 11845菌株中,再用红霉素抗性筛选及PCR鉴定,成功构建了RA ATCC11845（35）feoA,RA ATCC 11845（35）feoB和RA ATCC 11845（35）feoAB菌株。随后,将feoA,feoB和feoAB基因克隆至穿梭质粒pFY02,将重组质粒通过结合转移的方法转入相应缺失菌株中,成功构建相应的回补菌株。2 RA ATCC 11845株Feo系统的功能鉴定在TSB,含有60μmol/L Dip（二价铁离子螯合剂）的TSB和含有40μ... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

扩增HighEXP，pRA0726ori及oriT基因Fig.1-1AmplificationofHighEXP,pRA0726oriandoriT注：M:DNAMarker,Lane1:HighEXP,Lane2:pRA0726ori,Lane3:oriT.

1-1 扩增 High EXP，pRA0726 ori 及 o Amplification of High EXP, pRA0726Marker, Lane 1: High EXP, Lane 2: pRA0PM5::oriT粒的结合转移效率，本研究将转性内切酶 Sph I 和 Hind III 双酶切段并连接两个片段，将连接产物转性筛选后长出的菌落，再经 PCR电泳结果可以看出与预期结果一致将新构建质粒命名为 pPM5::oriT。

图 1-3 PCR 鉴定 pRA0726 ori 基因Fig.1-3 The PCR identification of pRA072注： M: DNAMarker, Lane 1: pRA0726 pFY02片段插入穿梭质粒上且提高基因的表多个酶切位点的高表达启动子序列酶切 High EXP 序列和质粒 pFY01，连接产物转化至 E. coli DH5α，通过，再经 PCR 鉴定 High EXP 基因（其与预期结果一致（图 1-4）。抽提质命名为 pFY02。

【参考文献】：
期刊论文
[1]鸭疫里默氏杆菌RecA作为一种内参蛋白的评价[J]. 廖何斌,刘马峰,程安春.  中国生物工程杂志. 2015(06)
[2]革兰氏阴性菌血红素转运系统结构及功能特点[J]. 程兴军,刘马峰,程安春.  中国生物化学与分子生物学报. 2014(09)



本文编号：3214544