髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒HB2015029株感染性克隆的构建与病毒拯救

发布时间：2021-06-09 08:52

　　为了拯救具有感染性的髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒（avian leukosis virus,ALV）HB2015029株,本研究以含有ALV-J HB2015029株基因组片段的质粒为模板,采用高保真PCR,扩增出3段重叠并含有合适酶切位点病毒基因片段。将获得的基因组片段分别克隆至pTopo-Blunt Simple载体,经过酶切、连接成功构建了含有病毒全基因组的质粒TOPO-029-ABC。将TOPO-029-ABC质粒转染进DF-1细胞进行病毒拯救,结果表明,转染72 h后的细胞上清禽白血病病毒P27抗原呈阳性;将阳性细胞上清,接种新的DF-1细胞培养3 d,P27抗原ELISA检测、特异性PCR和间接免疫荧光试验均呈阳性,表明成功构建了ALV-J HB2015029感染性克隆,并拯救具有感染性的髓细胞瘤型ALV-J,命名为rHB2015029。 

【文章来源】：畜牧与兽医. 2020,52(04)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

rHB2015029的IFA检测结果

先用MluⅠ、EcoRⅠ分别酶切TOPO-029-A、TOPO-029-B,将A片段连接入TOPO-029-B片段,构建TOPO-029-AB质粒;再用KpnⅠ、SalⅠ分别酶切TOPO-029-AB和TOPO-029-C后,将C片段连接入TOPO-029-AB,构建TOPO-029-ABC,阳性克隆用M13通用引物进行检测和酶切鉴定(如图1)。酶切反应均采用50 μL体系,即:10×CutSmart 5 μL,核酸内切酶 Mul I-HF和EcoR I-HF各1.5 μL或KpnI-HF和Sal I-HF各1.5 μL,对应的质粒2 μg,补去离子水至50 μL。1.5 转染与拯救

基因组克隆

【参考文献】：
期刊论文
[1]J亚群禽白血病病毒GDHX01株分离与基因序列分析[J]. 阮灼豪,谢婷婷,王归燕,莫国东,冯敏,张细权.  中国家禽. 2018(21)
[2]J亚群禽白血病病毒诱导免疫抑制及其相关信号通路研究进展[J]. 郭衍冰,曹利利,董航,姚新华,苑淑贤,姜旭,宋建臣,贾立军,姚琳,程荣华,邵洪泽,许志林.  动物医学进展. 2019(01)
[3]禽白血病研究进展[J]. 李浩然.  养禽与禽病防治. 2017(01)
[4]髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒四川株SCGS-1的分离鉴定及前病毒cDNA重组质粒的构建[J]. 林艳,赵扬,夏静,邹年丽,文心田,曹三杰,黄勇.  中国兽医学报. 2013(08)
[5]1株髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒感染性克隆的构建与病毒拯救[J]. 林艳,夏静,邹年莉,郭明萍,王富妍,赵扬,文心田,曹三杰,黄勇.  畜牧兽医学报. 2013(05)
[6]J亚群禽白血病病毒分离株HLJ09SH01株感染性克隆的构建及其致病性研究[J]. 纪晓琳,王琦,高玉龙,王永强,秦立廷,祁小乐,高宏雷,王笑梅.  中国预防兽医学报. 2013(01)
[7]蛋鸡J亚群禽白血病病毒3′非编码区序列特征分析[J]. 高玉龙,贠炳岭,秦立廷,潘伟,王永强,高宏雷,祁小乐,王笑梅.  畜牧兽医学报. 2012(11)
[8]我国近10年鸡白血病流行病学报道与研究分析[J]. 王洪进,张青禅,赵冬敏,柴家前,常维山,崔治中,郭慧君.  中国兽医学报. 2011(02)
[9]我国部分地区蛋鸡群ALV-J及与REV、MDV、CAV混合感染检测[J]. 秦立廷,高玉龙,潘伟,邓小芸,孙芬芬,李凯,祁小乐,高宏雷,刘超男,王笑梅.  中国预防兽医学报. 2010(02)
[10]黄羽肉种鸡J亚群白血病病例诊断初报[J]. 张丹俊,潘孝成,赵瑞宏,王少林.  中国畜牧兽医. 2008(02)

博士论文
[1]髓细胞瘤相关A和K亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性[D]. 梁雄燕.长江大学 2018



本文编号：3220278