浮舰蛋白与细胞型朊蛋白在中国仓鼠卵巢细胞内表达的研究
发布时间：2021-06-11 14:51
疯牛病等海绵状脑病是由细胞型朊蛋白PrPC)构象转变形成的朊病毒（PrPSc）导致的。PrPC广泛分布于各种细胞内并参与信号转导等细胞事件。PrPC在卵巢和输卵管内表达,与卵泡发育和受精卵形成有关。浮舰蛋白（flotillins）形成的脂筏不仅是PrPC转变成PrPSc的场所,而且为PrPC发挥生理功能提供了平台。研究PrPC与flotillins相互作用对卵巢细胞信号转导的影响对于明晰PrPC在卵巢细胞内的作用具有重要意义。本研究旨在实现全长PrP （PrP-ORF）、成熟PrP（PrP25-241）、浮舰蛋白-1（flotillin-1,Flot-1）和浮舰蛋白-2（flotillin-2,Flot-2）在野性型中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1内的表达,为了进一步的免疫共沉淀确定两者之间的相互作用,以及利用CHO-K1基因组表达谱芯片分析两者相互作用对CHO-K1细胞信号转导的影响奠定基础。为确定Kozak序列对外源基因在CHO-K1中表达的影响,首先以氯霉素乙酰转移酶（chloramphenicol acetyltransferase,CAT）编码基因和pcDNA3.1/Myc-Hi...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CAT-01F、CAT-02F、CAT-03F的PCR扩增结果
图 2.2 CAT-OIF. CAT-02F、CAT-03F 的 PCR 产物胶回收结果Fig.2.1 PCR products of CAT-OIF、CAT-02F、CAT-03F分子质量标准；1: CAT-0】F扩增产物；2: CAT-02F Jf增产物；3: CADNA Marker; 1 :PCR product of CAT-01F;2:PCR product of CAT-02F;CAT-03F
37°C酶切3h后进行琼脂糖凝胶电泳，双酶切鉴定结果如图2.3。oooobpSjpjp . .7000bp焉 b ‘ _g|:P1 ooobp & pfw.EHgjM 3 ooobp50O5 巧,—..-fSS-^OObp::_bp图2,3重组质粒的双酶切鉴定结果Fig2.3 Restriction enzyme digestion analysis of the recombinant plasmidMl、M2: DNA 分子质量标准；1: pcDNA3,l/Myc-His(-)B-CAT-01F 的瓜双酶切结果；2 ： pcDNA3.1/Myc-His(-)B-CAT-02F 的 Xho I +所％7111 双酶切结果；3： pcDNA3.1/Myc-His(-)B-CAT-0:3F 的 I双酶切结果。M1:DL2000 DNA Marker;M2:DL10000 DNA Marker;1 :Product of pcDNA3.1 /Myc-His(-)B-CAT-01F digested by Xho I -^HindSS.；2 :Product ofpcDNA3.1/Myc-His(-)B-CAT-02F digested Xho I ；3:Product of pcDNA3.1/Myc-His(-)B-CAT-03F digested by Xho I根据酶切鉴定结果，最后将酶切鉴定结果为阳性的质粒送到北京金唯智公司测序。将测序结果用NCBI BLAST软件比对结果显示：CAT的测序结果与GenBank中CAT基因序列的同源性为99%，因此确定构建的重组质粒构建成功。17
【参考文献】：
期刊论文
[1]脂筏标记蛋白flotillin-2生理功能的研究进展[J]. 赵峰,张杰,李丽. 中国兽医科学. 2012(01)
本文编号：3224745
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CAT-01F、CAT-02F、CAT-03F的PCR扩增结果
图 2.2 CAT-OIF. CAT-02F、CAT-03F 的 PCR 产物胶回收结果Fig.2.1 PCR products of CAT-OIF、CAT-02F、CAT-03F分子质量标准；1: CAT-0】F扩增产物；2: CAT-02F Jf增产物；3: CADNA Marker; 1 :PCR product of CAT-01F;2:PCR product of CAT-02F;CAT-03F
37°C酶切3h后进行琼脂糖凝胶电泳，双酶切鉴定结果如图2.3。oooobpSjpjp . .7000bp焉 b ‘ _g|:P1 ooobp & pfw.EHgjM 3 ooobp50O5 巧,—..-fSS-^OObp::_bp图2,3重组质粒的双酶切鉴定结果Fig2.3 Restriction enzyme digestion analysis of the recombinant plasmidMl、M2: DNA 分子质量标准；1: pcDNA3,l/Myc-His(-)B-CAT-01F 的瓜双酶切结果；2 ： pcDNA3.1/Myc-His(-)B-CAT-02F 的 Xho I +所％7111 双酶切结果；3： pcDNA3.1/Myc-His(-)B-CAT-0:3F 的 I双酶切结果。M1:DL2000 DNA Marker;M2:DL10000 DNA Marker;1 :Product of pcDNA3.1 /Myc-His(-)B-CAT-01F digested by Xho I -^HindSS.；2 :Product ofpcDNA3.1/Myc-His(-)B-CAT-02F digested Xho I ；3:Product of pcDNA3.1/Myc-His(-)B-CAT-03F digested by Xho I根据酶切鉴定结果，最后将酶切鉴定结果为阳性的质粒送到北京金唯智公司测序。将测序结果用NCBI BLAST软件比对结果显示：CAT的测序结果与GenBank中CAT基因序列的同源性为99%，因此确定构建的重组质粒构建成功。17
【参考文献】：
期刊论文
[1]脂筏标记蛋白flotillin-2生理功能的研究进展[J]. 赵峰,张杰,李丽. 中国兽医科学. 2012(01)
本文编号：3224745
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