布鲁菌VirB5基因的克隆和原核表达及其蛋白纯化

发布时间：2021-06-14 07:40

　　布鲁菌Ⅳ型分泌系统是其重要的毒力因子之一,研究其组分中VirB5基因的作用对于阐明布鲁菌的致病机制具有重要意义。应用PCR技术从B.suis S2菌株中扩增VirB5基因,克隆到pMD19T-simple载体,经EcoRⅠ、XhoⅠ酶切,与表达载体pET32a连接,得到重组质粒pET32a-VirB5,测序鉴定正确后,转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中,通过IPTG诱导并确定最佳诱导条件,采用Ni柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果表明,克隆了717 bp大小的VirB5基因,构建了重组质粒pET32a-VirB5,诱导条件筛选表明,在37℃、菌液OD₆₀₀值约为0.6时,用1.0 mmol/L IPTG诱导6 h,蛋白表达量最高,表达的蛋白分子质量约为45 ku,且主要以包涵体的形式存在,研究结果为布鲁菌致病机制的研究提供了材料。 

【文章来源】：动物医学进展. 2020,41(08)北大核心

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【部分图文】：

pET32a-VirB5酶切鉴定

VirB5蛋白的纯化

将提取的B.suis S2株基因组DNA样品用10 g/L琼脂糖凝胶电泳进行检测,其电泳结果如图1所示,显示提取的DNA纯度高。2.2 VirB5基因PCR扩增及重组质粒pMD19T-VirB5的鉴定

【参考文献】：
期刊论文
[1]布鲁氏菌VirB5基因的原核表达及生物信息学分析[J]. 童志霞,李天森,张辉,陈创夫.  生物技术. 2016(06)



本文编号：3229371