ACSL1基因对牛脂肪细胞中不饱和脂肪酸合成的影响
发布时间：2021-06-14 08:45
随着我国肉牛产业的快速发展和人们生活水平的不断提高,诸如“雪花牛肉”等优质肉类受到广大消费者的青睐。牛肉的肌内脂肪沉积和脂肪酸组成影响牛肉品质,高比例的不饱和脂肪酸与牛肉风味有关,有利于提高肉类营养价值。长链脂酰CoA合成酶1（Long-chain acyl-CoA synthetase 1,ACSL1）能够催化依赖ATP的脂肪酸酰化为酰基辅酶A,此过程是脂肪酸合成和进入细胞后的第一步。关联分析表明,ACSL1基因第五内含子的基因变异与骨骼肌中脂肪酸的相对含量和比例显著相关。另外,前期研究发现,在牛ACSL1基因的核心启动子区特异性结合着多个与脂肪细胞中不饱和脂肪酸合成相关的转录因子,协同调控ACSL1基因的表达,意味着ACSL1基因可能在牛肌内脂肪细胞中不饱和脂肪酸的合成过程中发挥重要调控作用。但目前关于该基因调控牛肌内前体脂肪细胞不饱和脂肪酸合成的作用机制尚未见报道。本研究以秦川牛脂肪细胞为研究对象,利用腺病毒体系过表达和siRNA干扰ACSL1基因,根据下游靶基因表达和脂肪细胞内脂肪酸组分的变化,来明确ACSL1基因对牛肌内前体脂肪细胞不饱和脂肪酸合成的作用。具体试验结果及结论如...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pcDNA3.1（+/-）载体图谱
甘肃农业大学2020届硕士学位论文182.2.8ACSL1基因腺病毒过表达载体构建（1）用EcoRI和BamHI对构建的pcDNA3.1-ACSL1重组质粒和空载腺病毒穿梭质粒pAdeno-EF1A(S)-mNeonGreen-CMV-MCS-3FLAG（H12588）（载体图谱如图2-2）分别进行双酶切，酶切体系如表2-7：图2-2空载质粒pAdeno-EF1A(S)-mNeonGreen-CMV-MCS-3FLAG（H12588）载体图谱Figure2-2pAdeno-EF1A(S)-mNeonGreen-CMV-MCS-3FLAG(H12588)vectormap表2-7酶切体系Table2-7Digestionreactionsystem试剂Reagent使用量Volume（μL）pcDNA3.1-ACSL1/H125884.0（1000ng）QuickcutEcoRI1.0QuickcutBamHI1.010×QuickcutGreenBuffer5.0加ddH2O补充至50.0琼脂糖凝胶电泳检测后分别用试剂盒进行回收纯化，之后用SolutionI连接酶连接，连接体系如表2-8：
ACSL1基因对牛脂肪细胞中不饱和脂肪酸合成的影响27第三章结果与分析3.1ACSL1基因重组腺病毒过表达载体构建与鉴定3.1.1ACSL1基因的克隆与鉴定ACSL1基因CDS区的PCR扩增产物约2100bp，经电泳检测条带单一可见，如图3-1所示。EcoRI和BamHI双酶切pcDNA3.1-ACSL1质粒，琼脂糖凝胶电泳分别得到约5328bp和2100bp两条片段（图3-2），与预期结果一致，表明ACSL1克隆载体构建成功。图3-1牛ACSL1基因CDS区的PCR产物Marker：DL2000DNAmarker；1：带限制性酶切位点的ACSL1基因的CDS区片段Figure3-1PCRproductofCDSregionofACSL1geneofcattleMarker：DL2000DNAmarker；1：FragmentofCDSregionofACSL1genewithrestrictionsites
【参考文献】：
期刊论文
[1]反刍动物肌内脂肪及脂肪酸调控研究进展[J]. 李鹤琼,罗海玲. 中国畜牧杂志. 2019(08)
[2]长链脂酰辅酶A合成酶及其调控因素的研究及进展[J]. 田亚英,傅念,吴清. 医学研究杂志. 2018(10)
[3]Long-chain acyl-CoA synthetase in fatty acid metabolism involved in liver and other diseases:An update[J]. Sheng Yan,Xue-Feng Yang,Hao-Lei Liu,Nian Fu,Yan Ouyang,Kai Qing. World Journal of Gastroenterology. 2015(12)
[4]A gene expression estimator of intramuscular fat percentage for use in both cattle and sheep[J]. Bing Guo,Kritaya Kongsuwan,Paul L Greenwood,Guanghong Zhou,Wangang Zhang,Brian P Dalrymple. Journal of Animal Science and Biotechnology. 2014(04)
[5]长链脂酰CoA合成酶（ACSL）的研究进展[J]. 李庆岗,陶著,杨玉增,张博,史利华,班冬梅,张浩. 中国畜牧兽医. 2012(06)
[6]秦川牛A-FABP基因的生物信息学分析[J]. 季舒涵,昝林森,王洪宝,刘艳妍. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2010(06)
[7]RNAi技术在动物功能基因组研究中的应用[J]. 梅盈洁,凌飞,李加琪. 广东农业科学. 2006(07)
[8]RNAi技术及其在哺乳动物基因功能研究中的应用[J]. 刘苏健,邓勇志. 山西医科大学学报. 2006(04)
[9]RNAi,a new therapeutic strategy against viral infection[J]. Fischer L.TAN,James Q.YIN. Cell Research. 2004(06)
博士论文
[1]鸡脂肪酸结合蛋白基因的克隆及其与肌内脂肪含量关系的研究[D]. 叶满红.中国农业科学院 2003
硕士论文
[1]FABP3及FABP4基因SNP检测及其与秦川肉牛肉质性状的关联性分析[D]. 余横伟.西北农林科技大学 2017
[2]FABP3基因在奶牛乳腺上皮细胞中的功能研究[D]. 梁梦瑶.东北农业大学 2014
本文编号：3229475
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pcDNA3.1（+/-）载体图谱
甘肃农业大学2020届硕士学位论文182.2.8ACSL1基因腺病毒过表达载体构建（1）用EcoRI和BamHI对构建的pcDNA3.1-ACSL1重组质粒和空载腺病毒穿梭质粒pAdeno-EF1A(S)-mNeonGreen-CMV-MCS-3FLAG（H12588）（载体图谱如图2-2）分别进行双酶切，酶切体系如表2-7：图2-2空载质粒pAdeno-EF1A(S)-mNeonGreen-CMV-MCS-3FLAG（H12588）载体图谱Figure2-2pAdeno-EF1A(S)-mNeonGreen-CMV-MCS-3FLAG(H12588)vectormap表2-7酶切体系Table2-7Digestionreactionsystem试剂Reagent使用量Volume（μL）pcDNA3.1-ACSL1/H125884.0（1000ng）QuickcutEcoRI1.0QuickcutBamHI1.010×QuickcutGreenBuffer5.0加ddH2O补充至50.0琼脂糖凝胶电泳检测后分别用试剂盒进行回收纯化，之后用SolutionI连接酶连接，连接体系如表2-8：
ACSL1基因对牛脂肪细胞中不饱和脂肪酸合成的影响27第三章结果与分析3.1ACSL1基因重组腺病毒过表达载体构建与鉴定3.1.1ACSL1基因的克隆与鉴定ACSL1基因CDS区的PCR扩增产物约2100bp，经电泳检测条带单一可见，如图3-1所示。EcoRI和BamHI双酶切pcDNA3.1-ACSL1质粒，琼脂糖凝胶电泳分别得到约5328bp和2100bp两条片段（图3-2），与预期结果一致，表明ACSL1克隆载体构建成功。图3-1牛ACSL1基因CDS区的PCR产物Marker：DL2000DNAmarker；1：带限制性酶切位点的ACSL1基因的CDS区片段Figure3-1PCRproductofCDSregionofACSL1geneofcattleMarker：DL2000DNAmarker；1：FragmentofCDSregionofACSL1genewithrestrictionsites
【参考文献】：
期刊论文
[1]反刍动物肌内脂肪及脂肪酸调控研究进展[J]. 李鹤琼,罗海玲. 中国畜牧杂志. 2019(08)
[2]长链脂酰辅酶A合成酶及其调控因素的研究及进展[J]. 田亚英,傅念,吴清. 医学研究杂志. 2018(10)
[3]Long-chain acyl-CoA synthetase in fatty acid metabolism involved in liver and other diseases:An update[J]. Sheng Yan,Xue-Feng Yang,Hao-Lei Liu,Nian Fu,Yan Ouyang,Kai Qing. World Journal of Gastroenterology. 2015(12)
[4]A gene expression estimator of intramuscular fat percentage for use in both cattle and sheep[J]. Bing Guo,Kritaya Kongsuwan,Paul L Greenwood,Guanghong Zhou,Wangang Zhang,Brian P Dalrymple. Journal of Animal Science and Biotechnology. 2014(04)
[5]长链脂酰CoA合成酶（ACSL）的研究进展[J]. 李庆岗,陶著,杨玉增,张博,史利华,班冬梅,张浩. 中国畜牧兽医. 2012(06)
[6]秦川牛A-FABP基因的生物信息学分析[J]. 季舒涵,昝林森,王洪宝,刘艳妍. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2010(06)
[7]RNAi技术在动物功能基因组研究中的应用[J]. 梅盈洁,凌飞,李加琪. 广东农业科学. 2006(07)
[8]RNAi技术及其在哺乳动物基因功能研究中的应用[J]. 刘苏健,邓勇志. 山西医科大学学报. 2006(04)
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博士论文
[1]鸡脂肪酸结合蛋白基因的克隆及其与肌内脂肪含量关系的研究[D]. 叶满红.中国农业科学院 2003
硕士论文
[1]FABP3及FABP4基因SNP检测及其与秦川肉牛肉质性状的关联性分析[D]. 余横伟.西北农林科技大学 2017
[2]FABP3基因在奶牛乳腺上皮细胞中的功能研究[D]. 梁梦瑶.东北农业大学 2014
本文编号：3229475
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