结核分枝杆菌MT3286蛋白的分离纯化与活性分析

发布时间：2021-06-15 08:58

　　结核病是严重影响人类和动物健康的慢性消耗性传染病,结核分枝杆菌和牛分枝杆菌是引起结核病的主要病原菌。艾滋病的广泛流行、国家和个人对卫生保护和知识上的匮乏,使结核病成为世界卫生组织最重要的问题之一。随着耐药结核杆菌的出现,结核杆菌对绝大多数治疗结核病的一线药物产生了不同程度的耐药性,结核病在全球范围内有回升趋势。在1990-2000期间,有41.5%的发展中国家和25%的发达国家结核病疫情明显上升1,2,3。PDZ结构域是介导蛋白质/蛋白质之间相互作用的常见结构域之一,参与细胞信号传导、细胞极性、细胞迁移与入侵及免疫细胞识别等重要的是生物学过程。因此,研究含有PDZ结构域的蛋白有助于更好地了解结核杆菌的在体内的耐药和扩散机制,为新的疫苗和药物研发提供靶标。本课题研究的MT3286蛋白来自结核分枝杆菌CDC1551菌株,与H37Rv、BCG等菌株在基因水平上有100%的同源性。目前关于该蛋白的结构和功能均没有报道,本文根据基因和载体的特点,首先构建pET28a-mt3286重组载体,然后在大肠杆菌BL21（DE3）中大量表达融合蛋白。经过不断优化表达和纯化条件,获得了高纯度的目的蛋白,蛋白... 

【文章来源】：福建农林大学福建省

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?一个二聚体蛋白的三级结构

－Ｓｙｎ的ＰＤＺ结构域形成的“头对尾”异源二聚体。神经元型一氧化氮合酶（ｎ６２位氨基酸Ａｓｐ?（蓝色）与其ｐ－ｆｍｇｅｒ结构域上的第１２１位的Ａｒｇ?（红色）神经元型一氧化氮合成酶Ｐ－ｆｍｇｅｒ结构域的稳定性；ｐ－ｆｍｇｅｒ结构域上从第１ｅ?（紫色）这一段序列，是对于因与互生ＰＤＺ结构域结合而造成ｐ－ｆｍｇｅｒ结。??容与研究意义??容??选取结合分支杆菌ＣＤＣ１５５１全基因组中的基因进行研究，该基Ｒｖ３１９４ｃ的同源性为１００％。研究内容主要包括四个部分：??表达载体ｐＥＴ－２８ａ和基因序列的特点，结合分子生物学知识，设妨，用以表达融合蛋白。??融合蛋白表达条件，确定最优表达条件。??和层析和分子筛层析纯化目的蛋白。??

?????组质粒示意图。Ｈｉｓ－ｔａｇ为载体ｐＥＴ－２８ａ所带，浅绿色部分为插入的目的片段，以ＮｄＲＩ双酶切，与酶切后质粒连接，表达带有Ｈｉｓ标签的重组蛋白。??游引物和下游引物分别设计上Ｎｄｅｌ和ＥｃｏＲＩ酶切位点，基因序列如下：??’

【参考文献】：
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本文编号：3230754