狂犬病毒G蛋白-羊痘病毒重组疫苗的构建

发布时间：2021-06-15 23:19

　　狂犬病是由狂犬病毒引起的高度致死性和接触性人兽共患病,几乎所有哺乳动物均可感染,一旦发病就意味着死亡。我国是狂犬病高发国家之一,加之疆土幅员辽阔,狼、狐狸等野生动物携带狂犬病毒的可能性较大,因此牧区牛羊受野生动物攻击而感染狂犬病的情况时有发生,如山西、内蒙、新疆塔城等地均有牛羊被其咬伤导致其感染狂犬病的报道。羊痘病毒作为痘病毒科的成员,是大型的线形DNA病毒,可容纳大量外源基因而不影响病毒的正常生长繁殖,因此常被作为载体生产活载体多价疫苗。为有效预防羊狂犬病,本研究以山羊痘病毒疫苗株为病毒活载体,以其腺甘酸酶基因（TK）为复制非必需区,以VV7.5基因或GTPV-A8R基因为启动子,绿色荧光蛋白（GFP）为报告基因,利用基因工程技术设计构建10株能重组狂犬病毒保护性抗原（G蛋白）的表达载体;制备培养羔羊睾丸原代细胞,通过脂质体转染法将构建成功的重组表达载体导入预先感染羊痘病毒疫苗株的羔羊睾丸细胞中,经同源重组获得能够表达狂犬病毒G蛋白的重组羊痘病毒,然后运用低熔点琼脂糖固定、挑取荧光斑点和倍比稀释传代的方式进行纯化,经4-6代传代纯化即可获得较纯的重组病毒,通过GFP基因表达率、细胞病... 

【文章来源】：塔里木大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-1片段模型

塔里木大学硕士学位论文第2章狂犬病毒G蛋白-羊痘病毒重组疫苗转移载体的构建20TK13-GFP-7.5-RVGQ-7.5、PGM-TK13-GFP-7.5-RVGW-7.5，用Acc65Ⅰ单酶切鉴定并测序。将酶切正确的重组质粒测序，确定重组质粒PGM-TK13-7.5-GFP、PGM-TK13-GFP-7.5-RVGQ-7.5、PGM-TK13-GFP-7.5-RVGW-7.5、PGM-TK13-7.5-GFP-RVGQ、PGM-TK13-7.5-GFP-RVGW、PGM-TK13-7.5-RVGQ-GFP、PGM-TK13-7.5-RVGW-GFP、PGM-TK13-RVGQ-A8R-GFP、PGM-TK13-RVGW-A8R-GFP，10株目标重组质粒获得其中8株，PGM-TK13-GFP-7.5-7.5-RVGQ、PGM-TK13-GFP-7.5-7.5-RVGW尚未获得，酶切鉴定结果如图2-6及图2-7。图2-2G蛋白基因全长及膜外区、VV7.5启动子分段PCR电泳图泳道M：DNAMarker2K；泳道1：GFP基因片段720bp；泳道4：G蛋白全长基因片段1575bp；泳道5：G蛋白膜外区基因片段1374bp；泳道7：启动子VV7.5片段180bp图2-37.5-GFP、7.5-RVGQ、7.5-RVGW基因片段融合PCR电泳图泳道M：DNAMarker2KPlusⅡ；泳道1：7.5-GFP基因片段900bp；泳道2：7.5-RVGQ基因片段1755bp；泳道3：7.5-RVGW基因片段1554bp

塔里木大学硕士学位论文第2章狂犬病毒G蛋白-羊痘病毒重组疫苗转移载体的构建20TK13-GFP-7.5-RVGQ-7.5、PGM-TK13-GFP-7.5-RVGW-7.5，用Acc65Ⅰ单酶切鉴定并测序。将酶切正确的重组质粒测序，确定重组质粒PGM-TK13-7.5-GFP、PGM-TK13-GFP-7.5-RVGQ-7.5、PGM-TK13-GFP-7.5-RVGW-7.5、PGM-TK13-7.5-GFP-RVGQ、PGM-TK13-7.5-GFP-RVGW、PGM-TK13-7.5-RVGQ-GFP、PGM-TK13-7.5-RVGW-GFP、PGM-TK13-RVGQ-A8R-GFP、PGM-TK13-RVGW-A8R-GFP，10株目标重组质粒获得其中8株，PGM-TK13-GFP-7.5-7.5-RVGQ、PGM-TK13-GFP-7.5-7.5-RVGW尚未获得，酶切鉴定结果如图2-6及图2-7。图2-2G蛋白基因全长及膜外区、VV7.5启动子分段PCR电泳图泳道M：DNAMarker2K；泳道1：GFP基因片段720bp；泳道4：G蛋白全长基因片段1575bp；泳道5：G蛋白膜外区基因片段1374bp；泳道7：启动子VV7.5片段180bp图2-37.5-GFP、7.5-RVGQ、7.5-RVGW基因片段融合PCR电泳图泳道M：DNAMarker2KPlusⅡ；泳道1：7.5-GFP基因片段900bp；泳道2：7.5-RVGQ基因片段1755bp；泳道3：7.5-RVGW基因片段1554bp


本文编号：3231895