布鲁氏菌BP26蛋白对鼠源树突状细胞分化及抗原提呈作用
发布时间：2021-06-16 03:05
构建pET-30a-BP26并在大肠杆菌中表达获得重组布鲁氏菌BP26蛋白,研究重组表达蛋白对鼠髓源树突状细胞分化及抗原提呈作用。设计布鲁氏菌BP26蛋白引物,PCR扩增该基因并酶切、连接在pET-30a载体上。将构建成功的pET-30a-BP26转化至感受态细胞BL21表达获得重组BP26蛋白。采用SDS-PAGE和Western-Blot检测蛋白表达量和反应原性后,用重组蛋白刺激BALB/C小鼠分离髓源树突状细胞（BM-DCs）,观察BM-DCs的成熟分化并利用流式细胞术进行表型分析。成功获得BP26重组蛋白,SDS-PAGE和Western-Blot分析结果表明,BP26重组蛋白可溶性高且具有良好的反应原性,流式细胞术检测结果显示,BP26能刺激BM-DCs分化成熟和抗原提呈作用。
【文章来源】：江苏农业学报. 2020,36(04)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【图文】：
表达载体双酶切图谱
SDS-PAGE鉴定pET-30a-BP26表达结果
将纯化诱导表达上清液中的BP26蛋白的各浓度咪唑洗脱液经SDS-PAGE鉴定分析,发现在泳道1有BP26蛋白和大量杂蛋白质出现,证明诱导表达上清中的蛋白质并未完全与High Affinity Ni-Charged Resin FF结合;泳道2出现了与泳道1相同的情况,证明LE Buffer据有将蛋白质从高亲和力树脂上洗脱下来的能力,泳道3～6并未出现明显的蛋白质条带,但是从泳道7、泳道8可以观察出BP26蛋白的表达量较多,而杂蛋白质条带几乎没有。说明20～160 mmol/L浓度咪唑洗脱液可以充分将杂蛋白质从亲和树脂上洗脱下来,洗脱效果最佳的咪唑浓度为40 mmol/L(图3)。2.3 BP26蛋白Western blotting检测结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]羊口疮病毒ORFV129蛋白对树突状细胞成熟和功能的影响[J]. 杜国玉,吴锦艳,曹小安,李玲霞,冯倩,尹双辉,周建华,刘永杰,尚佑军,刘湘涛,刘永生. 中国兽医科学. 2019(06)
[2]共刺激分子CD80、CD86及抗原递呈细胞DC在鼻咽疾病的应用研究[J]. 王丽祥,方琦. 微创医学. 2017(02)
[3]布鲁氏菌5种蛋白的原核表达及其作为间接ELISA检测用抗原的适用性比较[J]. 王勇,南文龙,巩明霞,张悦勇,彭大新,陈义平. 中国动物检疫. 2015(10)
[4]检测OMP28抗体不能有效诊断羊布鲁氏菌病[J]. 王芳,蒋卉,朱良全,王楠,张阁,鑫婷,朱鸿飞,丁家波. 微生物学通报. 2015(08)
[5]布鲁氏菌外膜蛋白BP26细胞毒性作用的研究[J]. 陈瑞花,张辉,唐利燕,孟茹,张豫,王震,李志强,张俊波,陈创夫. 中国农业科学. 2012(16)
[6]Semaphorins分子与树突状细胞的免疫功能[J]. 于秀石,田菊霞. 健康研究. 2011(06)
[7]布鲁氏菌BP26蛋白迟发型变态反应的研究[J]. 刘景福,李恪梅,王国治. 药物分析杂志. 2011(07)
[8]一对重要的免疫调节分子:CTLA-4及其抗体[J]. 蔡雷,任大明. 中国免疫学杂志. 2004(05)
博士论文
[1]CD80/CD86基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其在抗异基因小鼠心脏移植排斥的作用[D]. 顾晓冬.复旦大学 2010
硕士论文
[1]布鲁氏菌主要外膜蛋白对树突状细胞成熟度及抗原递呈的影响[D]. 童志霞.石河子大学 2018
[2]布鲁氏菌中CRISPR-Cas9基因编辑技术研究[D]. 李娜.华中农业大学 2017
[3]布鲁氏菌L7/L12、Omp31及其融合基因真核表达载体的构建及免疫原性研究[D]. 李仲乐.吉林农业大学 2016
[4]马耳他布氏菌弱毒疫苗M5-90外膜蛋白BP26和OMP31抗原表位及其疫苗免疫评价[D]. 吴静波.南方医科大学 2013
[5]共刺激分子CD28/CTLA-4在白癜风患者外周血T淋巴细胞的表达[D]. 杜军波.郑州大学 2012
[6]STIM1/STIM2对人外周血单核细胞来源的树突状细胞表型及免疫功能的影响[D]. 文津.泸州医学院 2012
[7]流产布鲁氏菌BP26蛋白B细胞线性表位的鉴定[D]. 羡东堡.东北农业大学 2012
[8]抗人CD80单链抗体（ScFv）及双价抗体（diabody）的研制及生物学功能初步研究[D]. 陈昌友.苏州大学 2011
[9]布氏杆菌BP26抗原特异单克隆抗体的制备与初步应用[D]. 杨帆.东北农业大学 2010
[10]共刺激分子B7-1，B7-2在大鼠热缺血再灌注肝脏表达的实验研究[D]. 纪志鹏.山东大学 2006
本文编号：3232232
【文章来源】：江苏农业学报. 2020,36(04)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【图文】：
表达载体双酶切图谱
SDS-PAGE鉴定pET-30a-BP26表达结果
将纯化诱导表达上清液中的BP26蛋白的各浓度咪唑洗脱液经SDS-PAGE鉴定分析,发现在泳道1有BP26蛋白和大量杂蛋白质出现,证明诱导表达上清中的蛋白质并未完全与High Affinity Ni-Charged Resin FF结合;泳道2出现了与泳道1相同的情况,证明LE Buffer据有将蛋白质从高亲和力树脂上洗脱下来的能力,泳道3～6并未出现明显的蛋白质条带,但是从泳道7、泳道8可以观察出BP26蛋白的表达量较多,而杂蛋白质条带几乎没有。说明20～160 mmol/L浓度咪唑洗脱液可以充分将杂蛋白质从亲和树脂上洗脱下来,洗脱效果最佳的咪唑浓度为40 mmol/L(图3)。2.3 BP26蛋白Western blotting检测结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]羊口疮病毒ORFV129蛋白对树突状细胞成熟和功能的影响[J]. 杜国玉,吴锦艳,曹小安,李玲霞,冯倩,尹双辉,周建华,刘永杰,尚佑军,刘湘涛,刘永生. 中国兽医科学. 2019(06)
[2]共刺激分子CD80、CD86及抗原递呈细胞DC在鼻咽疾病的应用研究[J]. 王丽祥,方琦. 微创医学. 2017(02)
[3]布鲁氏菌5种蛋白的原核表达及其作为间接ELISA检测用抗原的适用性比较[J]. 王勇,南文龙,巩明霞,张悦勇,彭大新,陈义平. 中国动物检疫. 2015(10)
[4]检测OMP28抗体不能有效诊断羊布鲁氏菌病[J]. 王芳,蒋卉,朱良全,王楠,张阁,鑫婷,朱鸿飞,丁家波. 微生物学通报. 2015(08)
[5]布鲁氏菌外膜蛋白BP26细胞毒性作用的研究[J]. 陈瑞花,张辉,唐利燕,孟茹,张豫,王震,李志强,张俊波,陈创夫. 中国农业科学. 2012(16)
[6]Semaphorins分子与树突状细胞的免疫功能[J]. 于秀石,田菊霞. 健康研究. 2011(06)
[7]布鲁氏菌BP26蛋白迟发型变态反应的研究[J]. 刘景福,李恪梅,王国治. 药物分析杂志. 2011(07)
[8]一对重要的免疫调节分子:CTLA-4及其抗体[J]. 蔡雷,任大明. 中国免疫学杂志. 2004(05)
博士论文
[1]CD80/CD86基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其在抗异基因小鼠心脏移植排斥的作用[D]. 顾晓冬.复旦大学 2010
硕士论文
[1]布鲁氏菌主要外膜蛋白对树突状细胞成熟度及抗原递呈的影响[D]. 童志霞.石河子大学 2018
[2]布鲁氏菌中CRISPR-Cas9基因编辑技术研究[D]. 李娜.华中农业大学 2017
[3]布鲁氏菌L7/L12、Omp31及其融合基因真核表达载体的构建及免疫原性研究[D]. 李仲乐.吉林农业大学 2016
[4]马耳他布氏菌弱毒疫苗M5-90外膜蛋白BP26和OMP31抗原表位及其疫苗免疫评价[D]. 吴静波.南方医科大学 2013
[5]共刺激分子CD28/CTLA-4在白癜风患者外周血T淋巴细胞的表达[D]. 杜军波.郑州大学 2012
[6]STIM1/STIM2对人外周血单核细胞来源的树突状细胞表型及免疫功能的影响[D]. 文津.泸州医学院 2012
[7]流产布鲁氏菌BP26蛋白B细胞线性表位的鉴定[D]. 羡东堡.东北农业大学 2012
[8]抗人CD80单链抗体（ScFv）及双价抗体（diabody）的研制及生物学功能初步研究[D]. 陈昌友.苏州大学 2011
[9]布氏杆菌BP26抗原特异单克隆抗体的制备与初步应用[D]. 杨帆.东北农业大学 2010
[10]共刺激分子B7-1，B7-2在大鼠热缺血再灌注肝脏表达的实验研究[D]. 纪志鹏.山东大学 2006
本文编号：3232232
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