羊痘病毒ORF95和ORF103的表达及iELISA方法研究
发布时间：2021-06-17 03:17
羊痘俗称羊“天花”，是由绵羊痘病毒或山羊痘病毒引起山羊或绵羊的一种高度接触性传染病。该病主要在亚洲、非洲和中东地区流行，我国多个省市尤其是西北地区都有爆发，严重影响了养殖业的发展。羊痘病毒属为线性双链DNA病毒，基因组大小约为150kbp。ORF95和ORF103均编码病毒粒子的核心蛋白，在病毒粒子装配中发挥重要作用。研究表明，两种蛋白均可与山羊痘和绵羊痘阳性血清发生反应，可作为该病诊断的候选抗原。随着羊痘流行范围日渐广泛，亟需建立一种高效、快速、灵敏、稳定的诊断方法以便于防控工作的开展。鉴于此，本研究进行了以下几方面的工作：1. ORF095与ORF103的克隆与序列分析从山羊痘活疫苗毒株基因组中扩增ORF95与ORF103，并连接至克隆载体pMD-18T。序列分析表明，两个基因与其它同源基因的相似性均在96.7%100%和96.9%100%之间。基于两个ORF的系统发育进化树均显示，本研究中的弱毒疫苗毒株与已登录的两个山羊痘病毒毒株构成一个分支，并与皮肤疙瘩病病毒构成一个大的分支，而绵羊痘病毒毒株构成另外一个分支。在线生物信息学软件预测表...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒pMD-18T-95和pMD-18T-103的PCR鉴定Fig.2-2IdentificationofrecombinantplasmidspMD-18T-95andpMD-18T-103byPCR
2.3.3 ORF95 和 ORF103 的序列分析2.3.3.1 ORF95 基因序列分析重组质粒 pMD-18T-95 的测序结果显示，山羊痘弱毒疫苗毒的 ORF95 基因大小为 483bp，编码蛋白由 161 个氨基酸残基组成。用 DNAStar 软件包中的 MegAlign 对 ORF95 基因测序结果与参考序列进行同源性比较。结果显示，ORF95 与 GenBank 登录的羊痘病毒属基因组(AY077834,AY077833, AY077832, AF409137, AF325528, AY077836, AY077835 和 AF409138)中同源基因的核苷酸一致性均大于 96.9%（图 2-3）。在线软件预测分析 ORF95 编码蛋白特点，结果显示，该蛋白的等电点为 8.43，极性氨基酸含量为 38.5%，其中带负电荷的氨基酸占 18.6%，带正电荷的氨基酸占 19.9%；二级结构预测结果显示，Helix 占 55.28%，Sheet 占 3.73，Loop 占 40.99%。并且该蛋白无信号肽序列和跨膜区。ORF95 核苷酸水平上的进化树分析表明，羊痘病毒属病毒可分为图 2-2. 重组质粒 pMD-18T-95 和 pMD-18T-103 的 PCR 鉴定Fig.2-2 Identification of recombinant plasmids pMD-18T-95 andpMD-18T-103 by PCRM: DNA 分子质量标准；1, 2, 3: ORF103; 4, 5, 6: ORF95M: DL2000 plus DNA Maker; 1, 2, 3: ORF103; 4, 5, 6: ORF95图 2-1. ORF95 和 ORF103 基因的 PCR 扩增Fig.2-1 PCR amplification of ORF95 and ORF103M: DNA 分子质量标准；1: ORF103; 2: ORF95M: DL2000 plus DNA Maker; 1: ORF103; 2:ORF95
152.3.3.2 ORF103 基因序列分析重组质粒 pMD-18T-103 的测序结果显示，山羊痘弱毒疫苗病毒的 ORF103 基因大小为 570bp，编码蛋白由 190 个氨基酸残基组成。ORF103 基因与参考序列同源性的比较结果显示，ORF103图 2-5 ORF95 编码蛋白的抗原性分析Fig. 2-5 Analysis of antigentic index of ORF95-encoding protein图 2-4 ORF95 基因进化发育树的构建Fig. 2-4 Phylogenetic analysis of ORF95 of Capripoxvirus
本文编号：3234354
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒pMD-18T-95和pMD-18T-103的PCR鉴定Fig.2-2IdentificationofrecombinantplasmidspMD-18T-95andpMD-18T-103byPCR
2.3.3 ORF95 和 ORF103 的序列分析2.3.3.1 ORF95 基因序列分析重组质粒 pMD-18T-95 的测序结果显示，山羊痘弱毒疫苗毒的 ORF95 基因大小为 483bp，编码蛋白由 161 个氨基酸残基组成。用 DNAStar 软件包中的 MegAlign 对 ORF95 基因测序结果与参考序列进行同源性比较。结果显示，ORF95 与 GenBank 登录的羊痘病毒属基因组(AY077834,AY077833, AY077832, AF409137, AF325528, AY077836, AY077835 和 AF409138)中同源基因的核苷酸一致性均大于 96.9%（图 2-3）。在线软件预测分析 ORF95 编码蛋白特点，结果显示，该蛋白的等电点为 8.43，极性氨基酸含量为 38.5%，其中带负电荷的氨基酸占 18.6%，带正电荷的氨基酸占 19.9%；二级结构预测结果显示，Helix 占 55.28%，Sheet 占 3.73，Loop 占 40.99%。并且该蛋白无信号肽序列和跨膜区。ORF95 核苷酸水平上的进化树分析表明，羊痘病毒属病毒可分为图 2-2. 重组质粒 pMD-18T-95 和 pMD-18T-103 的 PCR 鉴定Fig.2-2 Identification of recombinant plasmids pMD-18T-95 andpMD-18T-103 by PCRM: DNA 分子质量标准；1, 2, 3: ORF103; 4, 5, 6: ORF95M: DL2000 plus DNA Maker; 1, 2, 3: ORF103; 4, 5, 6: ORF95图 2-1. ORF95 和 ORF103 基因的 PCR 扩增Fig.2-1 PCR amplification of ORF95 and ORF103M: DNA 分子质量标准；1: ORF103; 2: ORF95M: DL2000 plus DNA Maker; 1: ORF103; 2:ORF95
152.3.3.2 ORF103 基因序列分析重组质粒 pMD-18T-103 的测序结果显示，山羊痘弱毒疫苗病毒的 ORF103 基因大小为 570bp，编码蛋白由 190 个氨基酸残基组成。ORF103 基因与参考序列同源性的比较结果显示，ORF103图 2-5 ORF95 编码蛋白的抗原性分析Fig. 2-5 Analysis of antigentic index of ORF95-encoding protein图 2-4 ORF95 基因进化发育树的构建Fig. 2-4 Phylogenetic analysis of ORF95 of Capripoxvirus
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