山羊钙敏感受体（CaSR）基因对乳腺上皮细胞钙代谢的分子调控研究
发布时间：2021-06-18 14:01
钙敏感受体（CaSR）是机体重要的钙稳态调节剂。它主要是通过控制血液中甲状旁腺相关肽（PTHrP）的水平，来控制血钙浓度。同时，它也可以通过调节质膜钙ATP酶（PMCA2）的活性控制细胞泵出钙的量，来维持细胞内的钙浓度。PTHrP的作用主要是促进钙离子向血液的运输以维持血钙水平；PMCA2的主要功能就是负责将乳腺上皮细胞内的钙离子转运到细胞外（乳汁中）；△FosB的主要生理作用是参与骨钙的沉积与骨钙转化；MMP-9在乳腺组织中主要参与组织重塑和细胞迁移，与乳汁的体细胞数和乳品质关系很大。目前CaSR与上述乳腺中重要的钙代谢基因PMCA2、△FosB、MMP-9的关系尚不清楚。另外，关于CaSR对山羊乳腺上皮细胞（GMECs）凋亡的影响尚未见报道。因此本研究对CaSR基因进行了克隆，并对该基因与ΔFosB、PMCA2、PTHrP和MMP-9基因的关系和对乳腺上皮细胞凋亡的影响进行了研究，为进一步揭示乳腺上皮细胞钙代谢的调控机制积累资料。获得试验结果如下：1)克隆了CaSR CDs区，共3531bp（Genbank登录号为KF006348）；该基因位于山羊1号染色体上；序列编码1085个氨...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
哺乳期间，乳腺上皮细胞的CaSR可以通过影响PMCA2和PTHrP的活性增加乳汁中钙离子转运量（VanHoutenandWysolmerski2013）
2.2.7 序列分析使用 Vector NTI 11.0 软件对山羊 CaSR 基因测序结果进行比对和拼接分析；利用ORF-finder（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/gorf/）预测 cDNA 的编码区；BLAST程序（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast）比较序列同源性；利用在线工具 Expert ProteinAnalysis System（http://www.bioinformatics.org/sms/）整理核酸与氨基酸序列；用 SMART（http://smart.embl-heidelberg.de/）和 Pfam 数据库（http://pfam.sanger.ac.uk/search）预测蛋 白 结 构 域 ； 利 用 CBS （ http://www.cbs.dtu.dk/services/TargetP/ ） 和 MitoProt（http://ihg.gsf.de/ihg/mitoprot.html）进行蛋白亚细胞定位分析。2.3 结果与分析2.3.1 山羊 CaSR 基因 cDNA 片段的克隆以山羊乳腺组织总 RNA（图 2-1A）反转录产物为模板，分别用 F1-R1、F2-R2、F3-R3为引物 PCR 扩增 CaSR 基因的 cDNA 片段，用 1%琼脂糖凝胶电泳检测（图 2-1B）。
2881 CGCCAGCGGTCCAGCAGCCTGGGGGGCTCCACGGGATCCACCCCCTCCTCCTCCATCAGCAGCAAGAGCAACAGCGAGGACCCCTTCCCG927 Q Q Q P E R Q K Q P Q P L A L S P H N A Q Q P Q P R P P S T2971 CAGCAGCAGCCGGAGAGGCAGAAGCAGCCACAGCCGCTGGCCCTGAGCCCGCACAACGCGCAGCAGCCGCAGCCGCGGCCACCCTCGACC957 P Q P Q P Q S Q Q P P R C K Q K V I F G S G T V T F S L S F3061 CCACAGCCGCAGCCACAGTCGCAGCAGCCGCCCCGATGCAAGCAGAAGGTCATCTTCGGCAGCGGCACCGTCACCTTCTCGCTGAGCTTT987 D E P Q K S A V A H R N S T H Q T S L E A Q K N N D A L T K3151 GACGAGCCTCAGAAGAGCGCCGTGGCTCACAGGAATTCCACGCACCAGACCTCCCTGGAGGCCCAGAAAAACAATGACGCCCTGACCAAA1017 H Q A L L P L Q C G E T D S E L T A Q E T G L Q G P V S E D3241 CACCAGGCGTTGCTCCCGCTGCAGTGCGGGGAGACGGACTCGGAACTGACCGCCCAGGAGACAGGCCTGCAGGGCCCTGTGAGTGAGGAC1047 H Q L E M E D P E E M S P A L V V S N S R S F V I S G G G S3331 CACCAGCTAGAGATGGAGGACCCCGAAGAGATGTCCCCAGCACTTGTAGTGTCTAATTCCCGGAGCTTTGTCATCAGCGGTGGAGGCAGC1077 T V T E N M L R S *3421 ACTGTTACAGAAAACATGCTGCGTTCTTAAAAGGGAAGGAGAAAGCCAGCTCAGGGAGAATCCAGGCAGTTTTCCCGGGATGACCTTCTC3511 CAAAGGGATGAGGAACTGCCC图 2-2 山羊 CaSR 基因 CDS 区全序列Fig.2-2. Nucleotide, deduced amino acid sequence and the predicted protein domains of goat CaSR.2.3.3 氨基酸序列的理化性质和磷酸化位点通过理化性质分析，氨基酸分子量为 121013.9Da，分子式是 C5446H8372N1432O1596S49，等电点是 5.65。（表 2-1）。通过磷酸化位点分析，18 个 Ser、6 个 Tyr 和 9 个 Thr 可能的蛋白激酶磷酸化位点（图 2-3）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Plasma membrane calcium pumps and their emerging roles in cancer[J]. Sarah J Roberts-Thomson,Merril C Curry,Gregory R Monteith. World Journal of Biological Chemistry. 2010(08)
[2]动物细胞外钙敏感受体研究进展[J]. 邓光存,乔健. 中国兽医杂志. 2008(10)
本文编号：3236791
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
哺乳期间，乳腺上皮细胞的CaSR可以通过影响PMCA2和PTHrP的活性增加乳汁中钙离子转运量（VanHoutenandWysolmerski2013）
2.2.7 序列分析使用 Vector NTI 11.0 软件对山羊 CaSR 基因测序结果进行比对和拼接分析；利用ORF-finder（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/gorf/）预测 cDNA 的编码区；BLAST程序（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast）比较序列同源性；利用在线工具 Expert ProteinAnalysis System（http://www.bioinformatics.org/sms/）整理核酸与氨基酸序列；用 SMART（http://smart.embl-heidelberg.de/）和 Pfam 数据库（http://pfam.sanger.ac.uk/search）预测蛋 白 结 构 域 ； 利 用 CBS （ http://www.cbs.dtu.dk/services/TargetP/ ） 和 MitoProt（http://ihg.gsf.de/ihg/mitoprot.html）进行蛋白亚细胞定位分析。2.3 结果与分析2.3.1 山羊 CaSR 基因 cDNA 片段的克隆以山羊乳腺组织总 RNA（图 2-1A）反转录产物为模板，分别用 F1-R1、F2-R2、F3-R3为引物 PCR 扩增 CaSR 基因的 cDNA 片段，用 1%琼脂糖凝胶电泳检测（图 2-1B）。
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【参考文献】：
期刊论文
[1]Plasma membrane calcium pumps and their emerging roles in cancer[J]. Sarah J Roberts-Thomson,Merril C Curry,Gregory R Monteith. World Journal of Biological Chemistry. 2010(08)
[2]动物细胞外钙敏感受体研究进展[J]. 邓光存,乔健. 中国兽医杂志. 2008(10)
本文编号：3236791
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