猪星状病毒4型检测方法的建立及其核酸疫苗的初步构建
发布时间：2021-06-22 03:58
星状病毒（Astrovirus）是一类宿主众多的RNA病毒,常见症状为腹泻,除此之外还有神经症状、呼吸症状、肝炎、肾炎、肠叠套等。多项研究表明星状病毒易发生跨物种的传播和基因重组,该病毒已成为一种潜在的人畜共患病原。猪星状病毒（Porcine astrovirus,PAstV）共分为5个基因型,虽然各个地区流行的基因型不尽相同,但都具有较高的感染率,并且存在多种基因型共同感染的现象。然而目前关于猪星状病毒检测技术及预防手段的研究仍较少。本研究对河北地区一株猪星状病毒进行了遗传进化分析,并建立了检测猪星状病毒4型的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR方法和间接ELISA检测方法,对河北地区猪星状病毒的基因结构和流行情况进行了初步的调查。另一方面本研究初步构建了可用作核酸疫苗的真核表达载体并进行了免疫原性研究,为以后的猪星状病毒疫苗研究工作奠定了基础。本研究从河北地区的猪腹泻病料样品中检测到一株猪星状病毒,并命名为PAstV4 CH-HB-SJZ。随后设计引物进行基因序列的扩增并进行了进化树分析及同源性分析。试验中成功扩增出6733 nt的病毒序列,包括全部病毒CDS片段和5’UTR,以及大...
【文章来源】：河北农业大学河北省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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【参考文献】：
期刊论文
[1]2015—2017年东北地区猪星状病毒ORF1b基因分子流行病学调查[J]. 杨丹,张备,朱金海,翟军军,孔凡志,孙东波. 黑龙江畜牧兽医. 2019(13)
[2]云南大理某农村猪星状病毒分子流行病学调查[J]. 刘承波,宿凌云,邹莉,杨琳娜,董薇,马倩,闫雪兰,冯云. 中国生物制品学杂志. 2017(06)
[3]猪星状病毒2型PCR检测分型方法的建立及初步应用[J]. 罗璋,罗季委,李海锦,贺巨炬,彭旺,李润成,余兴龙,肖朝庭. 湖南畜牧兽医. 2016(02)
[4]DNA疫苗研究进展[J]. 郭杨,方刚. 微生物学免疫学进展. 2013(05)
[5]广西猪星状病毒分子流行病学调查[J]. 兰家暖,刘磊,郭旋,张民秀,卢冰霞,黄福标,覃熊慧,张宁,黄伟坚. 中国预防兽医学报. 2012(08)
[6]猪星状病毒的分离鉴定及其致病性研究[J]. 兰家暖,郭旋,刘磊,张民秀,卢冰霞,廖承球,黄福标,黄伟坚. 中国畜牧兽医. 2012(07)
[7]DNA疫苗研究进展[J]. 郭小会. 国外畜牧学(猪与禽). 2010(05)
[8]猪星状病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用[J]. 商晓桂,郭伟,杨莲茹,杨志彪,华修国,朱建国,崔立. 畜牧兽医学报. 2010(08)
博士论文
[1]布鲁斯菌BvrR基因核酸疫苗的构建及免疫效果研究[D]. 陈博.中国医科大学 2018
[2]C3d分子佐剂核酸疫苗的构建与免疫效果研究[D]. 张德庆.山东农业大学 2011
硕士论文
[1]猪瘟病毒E0、E2基因的原核表达及间接ELISA方法建立[D]. 高佩佩.河北农业大学 2019
[2]猪博卡病毒的全基因组序列分析及检测方法建立[D]. 师乾凯.河北农业大学 2019
[3]猪丁型冠状病毒检测方法的建立及初步应用[D]. 罗尚星.河北农业大学 2018
[4]牛气肿疽CctA基因核酸疫苗的制备及免疫效果评价[D]. 齐强.延边大学 2017
[5]猪腹泻病原多重PCR检测方法的建立及主要病毒进化分析[D]. 孟丽.上海海洋大学 2017
[6]湖南地区猪星状病毒流行病学调查[D]. 罗璋.湖南农业大学 2016
[7]猪星状病毒RT-PCR检测方法的建立及两株江西地区猪星状病毒全基因组测序与分析[D]. 黄瑫.江西农业大学 2015
[8]猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及ELISA检测方法的初步建立[D]. 潘溪.中国农业科学院 2015
[9]B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护作用研究[D]. 李开铭.南华大学 2015
[10]CpG寡聚核苷酸在核酸疫苗中免疫增强作用研究[D]. 王蕾.东北师范大学 2014
本文编号：3242069
【文章来源】：河北农业大学河北省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２星状病毒的基因结构ｌ２９］??Ｆｉｇ．２?Ｔｈｅ?ｇｅｎｏｍｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?Ａｓｔｒｏｖｉｒｕｓ??
?河北农业大学硕士学位（毕业）论文???３结果与分析??３．１?ＰＡｓｔＶ临床检测结果??通过对采集自河北省的２０１９年仔猪腹泻粪便进行核酸的提取反转录以及ＰＣＲ，我们利用检??测引物ＰＡ－Ｆ／Ｒ检测到１份阳性样品，阳性样品进行回收并测序，测序结果显示样品确定为猪星??状病毒。??３．２?ＰＡｓｔＶ?ＣＨ－ＨＢ－ＳＪＺ株序列的扩增测序及分析??３．２．１基因序列的扩增??利用软件Ｐｒｉｍｅｒ?Ｐｒｅｍｉｅｒ设计７对引物对ＰＡｓｔＶ４型阳性样品进行基因序列的扩增，成功扩??增得到对应的目的片段，各目的片段大小分别为１５４４ｂｐ，１１９２ｂｐ，１２２７ｂｐ，１１７７ｂｐ，１４９５ｂｐ，??１３８４ｂｐ和１２７２ｂｐ?（图３）。目的片段回收连接转化及测序后，测序序列经ＮＣＢＩ网站基因比对，??均鉴定为ＰＡｓｔＶ无误。??ｂｐ?１?２３?Ｍ?４?５６?７??２０００??ｌｏｏｏ?．．．．．．．．．丨．丨??７５０?碥心?般，??５００?ｔ?＇１：｜｜?＇?’??２５０?｜?［＇??１００?Ｉ賴藝＿議鍵麵龜＿￡＿顏！＿震戀馨雞壽議??图３?ＰＡｓｔＶ基因序列的扩增??Ｍ．ＤＬ２０００?ＤＮＡ分子质量标准；１－７．?ＨＢ－ＳＪＺ片段??Ｆｉｇ．３?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｆｏｒ?ＰＡｓｔＶ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ??Ｍ．?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ，?１－７．?Ｔｈｅ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｏｆ?ＨＢ－ＳＪＺ?ｓｔｒａｉｎ??３．２．２?ＰＡｓｔＶ?ＣＨ－ＨＢ－ＳＪＺ株的基因结构特点分析??用ＤＮＡｓｔａｒ中的ＳｅｑＭａｎ软件对７个基因片段的测序结果进行拼接，得到了长为６７３３?ｎｔ的??２４??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]2015—2017年东北地区猪星状病毒ORF1b基因分子流行病学调查[J]. 杨丹,张备,朱金海,翟军军,孔凡志,孙东波. 黑龙江畜牧兽医. 2019(13)
[2]云南大理某农村猪星状病毒分子流行病学调查[J]. 刘承波,宿凌云,邹莉,杨琳娜,董薇,马倩,闫雪兰,冯云. 中国生物制品学杂志. 2017(06)
[3]猪星状病毒2型PCR检测分型方法的建立及初步应用[J]. 罗璋,罗季委,李海锦,贺巨炬,彭旺,李润成,余兴龙,肖朝庭. 湖南畜牧兽医. 2016(02)
[4]DNA疫苗研究进展[J]. 郭杨,方刚. 微生物学免疫学进展. 2013(05)
[5]广西猪星状病毒分子流行病学调查[J]. 兰家暖,刘磊,郭旋,张民秀,卢冰霞,黄福标,覃熊慧,张宁,黄伟坚. 中国预防兽医学报. 2012(08)
[6]猪星状病毒的分离鉴定及其致病性研究[J]. 兰家暖,郭旋,刘磊,张民秀,卢冰霞,廖承球,黄福标,黄伟坚. 中国畜牧兽医. 2012(07)
[7]DNA疫苗研究进展[J]. 郭小会. 国外畜牧学(猪与禽). 2010(05)
[8]猪星状病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用[J]. 商晓桂,郭伟,杨莲茹,杨志彪,华修国,朱建国,崔立. 畜牧兽医学报. 2010(08)
博士论文
[1]布鲁斯菌BvrR基因核酸疫苗的构建及免疫效果研究[D]. 陈博.中国医科大学 2018
[2]C3d分子佐剂核酸疫苗的构建与免疫效果研究[D]. 张德庆.山东农业大学 2011
硕士论文
[1]猪瘟病毒E0、E2基因的原核表达及间接ELISA方法建立[D]. 高佩佩.河北农业大学 2019
[2]猪博卡病毒的全基因组序列分析及检测方法建立[D]. 师乾凯.河北农业大学 2019
[3]猪丁型冠状病毒检测方法的建立及初步应用[D]. 罗尚星.河北农业大学 2018
[4]牛气肿疽CctA基因核酸疫苗的制备及免疫效果评价[D]. 齐强.延边大学 2017
[5]猪腹泻病原多重PCR检测方法的建立及主要病毒进化分析[D]. 孟丽.上海海洋大学 2017
[6]湖南地区猪星状病毒流行病学调查[D]. 罗璋.湖南农业大学 2016
[7]猪星状病毒RT-PCR检测方法的建立及两株江西地区猪星状病毒全基因组测序与分析[D]. 黄瑫.江西农业大学 2015
[8]猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及ELISA检测方法的初步建立[D]. 潘溪.中国农业科学院 2015
[9]B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护作用研究[D]. 李开铭.南华大学 2015
[10]CpG寡聚核苷酸在核酸疫苗中免疫增强作用研究[D]. 王蕾.东北师范大学 2014
本文编号：3242069
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