重组猪圆环病毒2型Cap蛋白在毕赤酵母中的表达及免疫原性研究

发布时间：2021-06-24 02:09

　　为了获得在体外表达的猪圆环病毒2型（Porcine circovirus 2,PCV2）Cap蛋白,研究其免疫原性,试验根据GenBank公布的国内PCV2-Cap蛋白基因序列特点,结合毕赤酵母密码子偏好对Cap基因进行优化,合成目的基因后,构建分泌型表达载体pPIC9K-Cap,转化毕赤酵母GS115后,经诱导表达获得重组Cap蛋白。重组蛋白以50μg/只的剂量连续3次免疫豚鼠后检测抗体水平。结果表明:含有PCV2-Cap基因的质粒成功转化到酵母菌基因组中,重组酵母菌株在30℃,经1%甲醇诱导表达96 h后,培养液中能够检测到33 ku的重组蛋白,重组蛋白表达量为155μg/mL,占培养上清液总蛋白的9.362%,Western-blot试验结果显示重组蛋白具有良好的抗原活性。重组蛋白以50μg/只的剂量连续3次免疫豚鼠后,能够刺激豚鼠产生特异性抗体且与接种0.3头份/只剂量的市售PCV2灭活疫苗产生的抗体水平无显著差异（P>0.05）。说明成功利用毕赤酵母表达系统分泌表达了PCV2-Cap蛋白,表达的重组蛋白具有良好的抗原活性。 

【文章来源】：黑龙江畜牧兽医. 2020,(10)北大核心

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【部分图文】：

PCV2-Cap基因PCR产物电泳结果

菌落PCR鉴定结果表明,空载体菌株扩增出492 bp的载体片段,克隆菌株扩增出1 194 bp目的基因片段,均与预期相符,见图3。测序结果表明与设计合成的基因序列完全一致。图3 重组酵母菌株的PCR鉴定结果

重组酵母菌株的PCR鉴定结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]华东地区猪圆环病毒2型基因型鉴别及ORF2遗传变异分析[J]. 王苗苗,王婷婷,朱建国.  畜牧与兽医. 2018(07)
[2]天津及周边地区猪圆环病毒2型流行情况调查及分离鉴定[J]. 王利丽,路超,任卫科,韩伟,李富强,郑丽,鄢明华.  中国畜牧兽医. 2018(04)
[3]重组猪圆环病毒2型Cap蛋白在毕赤酵母中的优化表达及疫苗活性研究[J]. 王斌,罗时渝,谢景毅,叶燕锐,潘力.  现代食品科技. 2018(04)
[4]猪圆环病毒II型ORF2基因在酵母中的高效分泌表达[J]. 张晓勇,郑其升,魏雪涛,谈国蕾,任雪枫,曹瑞兵,陈德胜,陈溥言.  中国病毒学. 2005(02)

博士论文
[1]猪圆环病毒2型抗原分型、构建中和表位分析及其V5表位标记重组毒株的构建[D]. 黄立平.中国农业科学院 2012

硕士论文
[1]猪圆环病毒2型Cap蛋白基因在毕赤酵母中的表达与复合水佐剂的研制[D]. 侯成才.南京农业大学 2014



本文编号：3246143